※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之銘言： : ※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言： : : 終於等到你上線了.......^^ : : 1.那可以問你買的 pronase的廠商以及貨號嗎？我查了sigma 跟辜狗大神有發現幾 : : 家，但是我還是不知道要買哪家的？ : : 不過要在買之前，還是要先問你怎麼查到底適不適合我的抗體呢？BTW我要染的是 : : 骨頭上面的細胞，Osteocalcin 跟cathepsin k。 : hmmmmmmmm... 這個有點抱歉捏~~~ 因為是兩年前的事情了~~ : 我已經忘掉貨號了, 但是依稀記得是sigma的沒錯.. 沒關係，至少有線索，我再聯絡sales~~~ : 另外, 抗體的data sheet會有recommand的retrival方式, antigen的話, 我只能說, : 一個一個試吧, 我那時候也是一個一個試, 不過~~~ 你可以問問看賣你抗體的sales, : 有沒有別間實驗室有買, 打聽一下有染出來的實驗室是用甚麼方式..XDD : 這兩個protein我只有做過WB, 沒有染過IHC說, 抱歉可能無法幫你的忙~~@@ : : 2.我發現我講錯了>''<，那篇paper是用methanol加上H2O2(paper寫的，for antigen : : retrieval )，不過染出來就是非常淡...幾乎看不見，不過很神奇的是那篇paper : : 的圖還可以看到細胞就是了>_<。 : 用Methanol還寫for antigen retrival就更奇怪了, 這明明是H2O2的配法啊~~ : 能偷偷問是哪一本journal嗎??? 這篇期刊是Journal of cell physiology~~他確實是寫for antigen retrieval~ 不過Teacher看了之後，覺得這個步驟是他在#$%^&* : Beside, 有一些IHC是不做retrival的步驟的~~ : : 3.另外呢~我的脫鈣液是買日本試藥的decalcifier(rapid)，這個脫鈣非常快， : : 一個禮拜就差不多了。但是他的藥品的詳細資料我查不太到，是病理科用的， : : 我會再查查他的成分的，因為我目前用一種acid phosphatase leukocyte kit， : : 完全沒有辦法染出來，讓我開始懷疑他的成分。大部分的paper是用EDTA脫鈣， : : 所以我猜脫鈣液可能要再找找。 : 嘛~~~ 通常快速脫鈣液都是acid base喔~~ data sheet上是否有寫可應用於IHC? 這家公司送來都沒有data sheet，可能明天得打個電話去問 我猜是分裝的!! : : 4.另外可以問你EDTA的泡法嗎？大概脫鈣多久？condition是如何？ : : 我目前有看到有人用14% 10% 20%脫鈣時間則很少人寫， : : pH有7.4或8的。 : : 麻煩你了~ : EDTA的泡法google一下應該找的到, 我用的是0.5M EDTA, ph8.0.. : 時間嘛, 你是mice or rat? 用EDTA脫mice tibia or femur, : 4度C下shaking, 每兩天或三天換一次EDTA, 約10天. : rat用EDTA可能要脫3個月.. 是的, 三個月~~ : in addition, 脫鈣也不能脫太久喔~~ marrow會流失.. 我做的正是大鼠的femur，這真是太恐怖了 三個月@@ 也難怪我現在try 的10% EDTA pH8.0脫了兩個禮拜...硬的跟什麼鬼似的XDDD : PS. 一併回這好了, D道友用的膠帶法我也玩過(resin embedd calcified bone), : 是真的很好用, 可惜很貴, 而且只有那種膠帶可用~~~~~ 囧rz~~ 可以問大概多少價錢嗎？~~膠帶$ 我猜應該可以借到切片的機器，但是膠帶的$$看老闆能不能接受了~~~~>_< --

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