※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之铭言： : ※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言： : : 终於等到你上线了.......^^ : : 1.那可以问你买的 pronase的厂商以及货号吗？我查了sigma 跟辜狗大神有发现几 : : 家，但是我还是不知道要买哪家的？ : : 不过要在买之前，还是要先问你怎麽查到底适不适合我的抗体呢？BTW我要染的是 : : 骨头上面的细胞，Osteocalcin 跟cathepsin k。 : hmmmmmmmm... 这个有点抱歉捏~~~ 因为是两年前的事情了~~ : 我已经忘掉货号了, 但是依稀记得是sigma的没错.. 没关系，至少有线索，我再联络sales~~~ : 另外, 抗体的data sheet会有recommand的retrival方式, antigen的话, 我只能说, : 一个一个试吧, 我那时候也是一个一个试, 不过~~~ 你可以问问看卖你抗体的sales, : 有没有别间实验室有买, 打听一下有染出来的实验室是用甚麽方式..XDD : 这两个protein我只有做过WB, 没有染过IHC说, 抱歉可能无法帮你的忙~~@@ : : 2.我发现我讲错了>''<，那篇paper是用methanol加上H2O2(paper写的，for antigen : : retrieval )，不过染出来就是非常淡...几乎看不见，不过很神奇的是那篇paper : : 的图还可以看到细胞就是了>_<。 : 用Methanol还写for antigen retrival就更奇怪了, 这明明是H2O2的配法啊~~ : 能偷偷问是哪一本journal吗??? 这篇期刊是Journal of cell physiology~~他确实是写for antigen retrieval~ 不过Teacher看了之後，觉得这个步骤是他在#$%^&* : Beside, 有一些IHC是不做retrival的步骤的~~ : : 3.另外呢~我的脱钙液是买日本试药的decalcifier(rapid)，这个脱钙非常快， : : 一个礼拜就差不多了。但是他的药品的详细资料我查不太到，是病理科用的， : : 我会再查查他的成分的，因为我目前用一种acid phosphatase leukocyte kit， : : 完全没有办法染出来，让我开始怀疑他的成分。大部分的paper是用EDTA脱钙， : : 所以我猜脱钙液可能要再找找。 : 嘛~~~ 通常快速脱钙液都是acid base喔~~ data sheet上是否有写可应用於IHC? 这家公司送来都没有data sheet，可能明天得打个电话去问 我猜是分装的!! : : 4.另外可以问你EDTA的泡法吗？大概脱钙多久？condition是如何？ : : 我目前有看到有人用14% 10% 20%脱钙时间则很少人写， : : pH有7.4或8的。 : : 麻烦你了~ : EDTA的泡法google一下应该找的到, 我用的是0.5M EDTA, ph8.0.. : 时间嘛, 你是mice or rat? 用EDTA脱mice tibia or femur, : 4度C下shaking, 每两天或三天换一次EDTA, 约10天. : rat用EDTA可能要脱3个月.. 是的, 三个月~~ : in addition, 脱钙也不能脱太久喔~~ marrow会流失.. 我做的正是大鼠的femur，这真是太恐怖了 三个月@@ 也难怪我现在try 的10% EDTA pH8.0脱了两个礼拜...硬的跟什麽鬼似的XDDD : PS. 一并回这好了, D道友用的胶带法我也玩过(resin embedd calcified bone), : 是真的很好用, 可惜很贵, 而且只有那种胶带可用~~~~~ 囧rz~~ 可以问大概多少价钱吗？~~胶带$ 我猜应该可以借到切片的机器，但是胶带的$$看老板能不能接受了~~~~>_< --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.52.228