我之前 題目是在觀查血液幹細胞和osteoblast 的關係， 所以我對於骨髓和endosteum 的完整也必需要求。 這是沒辦法的事，我發現只有fresh bone section ， 就是骨頭取出來之後就立刻包埋切片，un-fixed, un-decalcified ， 唯有這樣，骨髓和endosteum 才不會分家。 至於到底是calcified 還是fixative 造成這種分家的問題，我也不很清楚。 也有可能是dehydration 的步驟造成的。 一般paraffin section 製備，也有酒精脫水，若是frozen 也有用sucrose 不是嗎！ 我後來通通都免去了。 一般prepare 的方法，有些人覺得這樣沒問題，但是在我手上就很麻煩， 就算我不理會分家的問題，那些CD marker 還是會被formalin-based fixative 殺光。 膠帶法正式應稱做Tape-traner method， 有兩家在賣這種東西 http://www.instrumedics.com/cryojane.htm 另外一家是日本廠的，叫Section-lab 也有賣。 是的，要花一點錢，膠帶法配合鎢碳鋼刀及刀座(Leica 機台)， 在台灣兩個一起買要約18萬。 本來不想花錢，我還去超市自己買了一堆各式膠帶，最後還是花錢消災。 但是用了之後效果好很多，immunostain 時也不需要什麼前處理。 如果您身旁有牙科或骨科的話，他們實驗室也許會有這些東西。 希望對您有幫助。 ※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言： : ※ 引述《DouglasT (sdf)》之銘言： : : 我也做過一些bone section immunostain， : : 我也碰過你的問題，而且殘存的section 就算有染上，也不能照相。 : : 我沒真的測試過，但我覺得很多CD marker 對福馬林類的fix 都很不耐， : : 就算antigen retrieval 沒掉片也染不出來。 : : 我後來用frozen section，同時參考別的paper 用膠帶法，掉片的問題就解決了。 : : 同時我也不用福馬林類做fix ，是採用fresh bone secton， : : 在染之前用EtOH 或Acetone 短暫fix ，很多染不出來的CD marker 都活回來了， : : 不是CD marker 的antigen 他們的intensity 也會變強， : : 效果顯著。 : : 你可以參考一下。 : 又多了一個人來討論這個困擾人的問題了~XD : 進入主題!! : 想請問你是觀察骨頭的哪個部份呢? : 我之前有嘗試過frozen section，就是用OCT包埋切片，不過這樣的方法，會發現 : 我要觀察的細胞，osteoblast跟osteoclast都脫離我的骨頭表面，就是會漂到 : bone marrow 中間，如果這樣以形態來說，就會變的沒有說服力，後來我們才用 : paraffin section。 : 另外想請問你，使用fresh bone section的話，是直接將骨頭取下，不灌流固定， : 直接切片，那這樣的話刀片不就要用鋼刀之類的刀片。>""< : 還有就是膠帶法~第一次聽到這樣的方法，可以跟我說一下這是什麼方法嗎? --

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