我之前 题目是在观查血液干细胞和osteoblast 的关系， 所以我对於骨髓和endosteum 的完整也必需要求。 这是没办法的事，我发现只有fresh bone section ， 就是骨头取出来之後就立刻包埋切片，un-fixed, un-decalcified ， 唯有这样，骨髓和endosteum 才不会分家。 至於到底是calcified 还是fixative 造成这种分家的问题，我也不很清楚。 也有可能是dehydration 的步骤造成的。 一般paraffin section 制备，也有酒精脱水，若是frozen 也有用sucrose 不是吗！ 我後来通通都免去了。 一般prepare 的方法，有些人觉得这样没问题，但是在我手上就很麻烦， 就算我不理会分家的问题，那些CD marker 还是会被formalin-based fixative 杀光。 胶带法正式应称做Tape-traner method， 有两家在卖这种东西 http://www.instrumedics.com/cryojane.htm 另外一家是日本厂的，叫Section-lab 也有卖。 是的，要花一点钱，胶带法配合钨碳钢刀及刀座(Leica 机台)， 在台湾两个一起买要约18万。 本来不想花钱，我还去超市自己买了一堆各式胶带，最後还是花钱消灾。 但是用了之後效果好很多，immunostain 时也不需要什麽前处理。 如果您身旁有牙科或骨科的话，他们实验室也许会有这些东西。 希望对您有帮助。 ※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言： : ※ 引述《DouglasT (sdf)》之铭言： : : 我也做过一些bone section immunostain， : : 我也碰过你的问题，而且残存的section 就算有染上，也不能照相。 : : 我没真的测试过，但我觉得很多CD marker 对福马林类的fix 都很不耐， : : 就算antigen retrieval 没掉片也染不出来。 : : 我後来用frozen section，同时参考别的paper 用胶带法，掉片的问题就解决了。 : : 同时我也不用福马林类做fix ，是采用fresh bone secton， : : 在染之前用EtOH 或Acetone 短暂fix ，很多染不出来的CD marker 都活回来了， : : 不是CD marker 的antigen 他们的intensity 也会变强， : : 效果显着。 : : 你可以参考一下。 : 又多了一个人来讨论这个困扰人的问题了~XD : 进入主题!! : 想请问你是观察骨头的哪个部份呢? : 我之前有尝试过frozen section，就是用OCT包埋切片，不过这样的方法，会发现 : 我要观察的细胞，osteoblast跟osteoclast都脱离我的骨头表面，就是会漂到 : bone marrow 中间，如果这样以形态来说，就会变的没有说服力，後来我们才用 : paraffin section。 : 另外想请问你，使用fresh bone section的话，是直接将骨头取下，不灌流固定， : 直接切片，那这样的话刀片不就要用钢刀之类的刀片。>""< : 还有就是胶带法~第一次听到这样的方法，可以跟我说一下这是什麽方法吗? --

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