我也做過一些bone section immunostain， 我也碰過你的問題，而且殘存的section 就算有染上，也不能照相。 我沒真的測試過，但我覺得很多CD marker 對福馬林類的fix 都很不耐， 就算antigen retrieval 沒掉片也染不出來。 我後來用frozen section，同時參考別的paper 用膠帶法，掉片的問題就解決了。 同時我也不用福馬林類做fix ，是採用fresh bone secton， 在染之前用EtOH 或Acetone 短暫fix ，很多染不出來的CD marker 都活回來了， 不是CD marker 的antigen 他們的intensity 也會變強， 效果顯著。 你可以參考一下。 ※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言： : ※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之銘言： : : 骨頭的切片不是很適合用煮的方式, : : 因為硬度的關係, 即便你脫鈣脫得非常完全, : : 在切片的時候切到wax and bone交界的時候還是會卡卡的, : : 這很容易造成一切看不到的連展片後也看不到的小皺摺~ : : 這是造成浮片的主因.. 我那時候已經用到最貴最好的coating玻片, : : 只要一煮照樣浮.. : : 後來是改用1mg/ml Pronase在37度處理30min就不會浮了, : : 但是Retrival的方式depends on你的抗體抗原喔, : : 我那時候從trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的.. : : 甚麼方法都試過了, 還有paper寫說要用兩種不同的solution (for cartilage) : : 試試看找一些相關的paper, 應該可以找到作者群是用哪種方式的囉~~ : : 加油~ : 那我可以再問細節一點的問題嗎? : 1.你用1mg/ml pronase處理過 還需要用煮的方法做antigne retrieval嗎? : 2.我後來其實有用acetone加H2O2去做antigen retrieval (某篇paper寫的) : 然而我很懷疑這樣真的能夠retrieval~雖然我染出來感覺有點出來。 : 但是真的好淡好淡 : 想問A大用的方法染出來就會很明顯嗎? : 3.另外就是我的脫鈣用的是commercial 的脫鈣液，並不是自己泡的EDTA， : 不知道這樣會不會影響貼片呢?因為大部分的paper是寫EDTA脫鈣? : 最後 很感謝A大~我以為這篇文章應該就會被埋沒起來了~結果又來了一道曙光 : 希望這次真的能夠克服掉片問題~ --

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