我也做过一些bone section immunostain， 我也碰过你的问题，而且残存的section 就算有染上，也不能照相。 我没真的测试过，但我觉得很多CD marker 对福马林类的fix 都很不耐， 就算antigen retrieval 没掉片也染不出来。 我後来用frozen section，同时参考别的paper 用胶带法，掉片的问题就解决了。 同时我也不用福马林类做fix ，是采用fresh bone secton， 在染之前用EtOH 或Acetone 短暂fix ，很多染不出来的CD marker 都活回来了， 不是CD marker 的antigen 他们的intensity 也会变强， 效果显着。 你可以参考一下。 ※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言： : ※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之铭言： : : 骨头的切片不是很适合用煮的方式, : : 因为硬度的关系, 即便你脱钙脱得非常完全, : : 在切片的时候切到wax and bone交界的时候还是会卡卡的, : : 这很容易造成一切看不到的连展片後也看不到的小皱摺~ : : 这是造成浮片的主因.. 我那时候已经用到最贵最好的coating玻片, : : 只要一煮照样浮.. : : 後来是改用1mg/ml Pronase在37度处理30min就不会浮了, : : 但是Retrival的方式depends on你的抗体抗原喔, : : 我那时候从trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的.. : : 甚麽方法都试过了, 还有paper写说要用两种不同的solution (for cartilage) : : 试试看找一些相关的paper, 应该可以找到作者群是用哪种方式的罗~~ : : 加油~ : 那我可以再问细节一点的问题吗? : 1.你用1mg/ml pronase处理过 还需要用煮的方法做antigne retrieval吗? : 2.我後来其实有用acetone加H2O2去做antigen retrieval (某篇paper写的) : 然而我很怀疑这样真的能够retrieval~虽然我染出来感觉有点出来。 : 但是真的好淡好淡 : 想问A大用的方法染出来就会很明显吗? : 3.另外就是我的脱钙用的是commercial 的脱钙液，并不是自己泡的EDTA， : 不知道这样会不会影响贴片呢?因为大部分的paper是写EDTA脱钙? : 最後 很感谢A大~我以为这篇文章应该就会被埋没起来了~结果又来了一道曙光 : 希望这次真的能够克服掉片问题~ --

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