作者begrace ()
看板Biotech
標題[求救] TRAP telomerase activity assay
時間Wed Mar 2 15:30:32 2011
不知道板上有沒有人在做相關的實驗....
最近在作telomerase activity的實驗 TRAP assay
目的是要看加入某個protein是否會影響細胞端粒酶活性
我是用commercial CHAPS buffer 買來直接收細胞lysate 不需要自己配
將lysate protein定量後 讓端粒酶在30度C反應
用傳統的PCR反應放大後 跑膠用SyBr Green stain
然後比較有表現某protein的pattern以及vector only的pattern
讓我困擾的是兩者的比較無法consistent
有時候有差異 然而當拿同一罐lysate再dilute後 結果又不一樣....
平常我lysate都存放在-80
想請問CHAPS的lysate 其telomerase活性是不是不容易保存...
另外也想知道板上其他有做過相關實驗的人
用跑膠的方法是不是較容易有不一致的結果
我查過Paper 有用ELISA或著Q-PCR的方式去看活性 這樣的方式會比較穩定嗎?
感謝~
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◆ From: 140.116.235.109
1F：推 antonino:我們家是用chemicon S7707的kit 不過還做不太出來> < 03/03 11:57
2F：→ antonino:我們最後是用ETBR染 03/03 11:57
3F：→ begrace:我有試過用EtBr跟SyBr Green的差異 SyBr Green好像會比較 03/03 16:12
4F：→ begrace:清楚 不過也比較貴= = 而且不能reuse... 03/03 16:12
5F：推 antonino:嗯嗯謝謝你~ 加油!! 03/06 00:31