作者begrace ()
看板Biotech
标题[求救] TRAP telomerase activity assay
时间Wed Mar 2 15:30:32 2011
不知道板上有没有人在做相关的实验....
最近在作telomerase activity的实验 TRAP assay
目的是要看加入某个protein是否会影响细胞端粒酶活性
我是用commercial CHAPS buffer 买来直接收细胞lysate 不需要自己配
将lysate protein定量後 让端粒酶在30度C反应
用传统的PCR反应放大後 跑胶用SyBr Green stain
然後比较有表现某protein的pattern以及vector only的pattern
让我困扰的是两者的比较无法consistent
有时候有差异 然而当拿同一罐lysate再dilute後 结果又不一样....
平常我lysate都存放在-80
想请问CHAPS的lysate 其telomerase活性是不是不容易保存...
另外也想知道板上其他有做过相关实验的人
用跑胶的方法是不是较容易有不一致的结果
我查过Paper 有用ELISA或着Q-PCR的方式去看活性 这样的方式会比较稳定吗?
感谢~
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◆ From: 140.116.235.109
1F：推 antonino:我们家是用chemicon S7707的kit 不过还做不太出来> < 03/03 11:57
2F：→ antonino:我们最後是用ETBR染 03/03 11:57
3F：→ begrace:我有试过用EtBr跟SyBr Green的差异 SyBr Green好像会比较 03/03 16:12
4F：→ begrace:清楚 不过也比较贵= = 而且不能reuse... 03/03 16:12
5F：推 antonino:嗯嗯谢谢你~ 加油!! 03/06 00:31