作者stephilow (無法輸入)
看板Biotech
標題[求救] 如何調取基因?
時間Wed Mar 2 12:23:14 2011
有個問題想請教
我最近在調取基因
我是抽total RNA轉成cDNA然後參考前人的研究
設計primer夾取基因
希望能夾到從ATG開始到stop codon可以作用的基因
但是經過定序後(跟別人已經釣出來的基因比對)
發現釣到的基因中間都會有intorn
就像這樣
ATG...............(intron)............(intron).........TGA
如果序列去掉intron重新translate
基因看起來似乎可以有作用
但是 我要怎樣把intron去掉拿到CDS的基因呢?
除了從頭做之外，還有其他方法嗎?
謝謝
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◆ From: 210.69.175.253
1F：推 akura:total RNA純化成mrna 03/02 12:36
2F：推 Rarelay:DNA 沒有去乾淨吧。如果有 gDNA 殘留就會有 intron。 03/02 14:10
3F：推 yaliu:因為gDNA殘留所以才P到intron，但是裡面應該還是有少量你目 03/02 15:41
4F：→ yaliu:標基因之mRNA~我認為放大出來長度會有所不同，可能你會放大 03/02 15:42
5F：→ yaliu:出兩條band~~其中一條不含intron~但前提是RNA要抽的好 03/02 15:42
6F：→ Ianthegood:重抽 03/02 20:32
7F：推 icome:請問有專一性的primer可以偵測gDNA存在嗎? 03/03 16:49
8F：→ icome:最近發現cDNA有gDNA污染 悲劇中... 03/03 16:49
9F：推 Rarelay:就不要RT直接PCR就知道有沒有gDNA了 03/03 16:54
10F：推 icome:已經翻完了... 用不同的primer放大同一段都會多出~200bp 囧 03/03 17:11