作者stephilow (无法输入)
看板Biotech
标题[求救] 如何调取基因?
时间Wed Mar 2 12:23:14 2011
有个问题想请教
我最近在调取基因
我是抽total RNA转成cDNA然後参考前人的研究
设计primer夹取基因
希望能夹到从ATG开始到stop codon可以作用的基因
但是经过定序後(跟别人已经钓出来的基因比对)
发现钓到的基因中间都会有intorn
就像这样
ATG...............(intron)............(intron).........TGA
如果序列去掉intron重新translate
基因看起来似乎可以有作用
但是 我要怎样把intron去掉拿到CDS的基因呢?
除了从头做之外，还有其他方法吗?
谢谢
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◆ From: 210.69.175.253
1F：推 akura:total RNA纯化成mrna 03/02 12:36
2F：推 Rarelay:DNA 没有去乾净吧。如果有 gDNA 残留就会有 intron。 03/02 14:10
3F：推 yaliu:因为gDNA残留所以才P到intron，但是里面应该还是有少量你目 03/02 15:41
4F：→ yaliu:标基因之mRNA~我认为放大出来长度会有所不同，可能你会放大 03/02 15:42
5F：→ yaliu:出两条band~~其中一条不含intron~但前提是RNA要抽的好 03/02 15:42
6F：→ Ianthegood:重抽 03/02 20:32
7F：推 icome:请问有专一性的primer可以侦测gDNA存在吗? 03/03 16:49
8F：→ icome:最近发现cDNA有gDNA污染 悲剧中... 03/03 16:49
9F：推 Rarelay:就不要RT直接PCR就知道有没有gDNA了 03/03 16:54
10F：推 icome:已经翻完了... 用不同的primer放大同一段都会多出~200bp 囧 03/03 17:11