※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之銘言： : ※ 引述《hchung (hiflypig)》之銘言： : : 骨頭是用石蠟包埋切7 um : : 再用commercial的玻片貼片 : : 接著用trisodium citrate dihydrate 配antigen retrival solution : : pH6.0 : : 用 hot plate加熱到95C : : 不過 我們同時放入骨頭跟大腦的石蠟切片 : : 只有骨頭掉下來... : : 不知道為什麼 : : try了好幾次都這樣 : : 大概在70度就飄片了 : : 不知道板上的大家有什麼 : 骨頭的切片不是很適合用煮的方式, : 因為硬度的關係, 即便你脫鈣脫得非常完全, : 在切片的時候切到wax and bone交界的時候還是會卡卡的, : 這很容易造成一切看不到的連展片後也看不到的小皺摺~ : 這是造成浮片的主因.. 我那時候已經用到最貴最好的coating玻片, : 只要一煮照樣浮.. : 後來是改用1mg/ml Pronase在37度處理30min就不會浮了, : 但是Retrival的方式depends on你的抗體抗原喔, : 我那時候從trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的.. : 甚麼方法都試過了, 還有paper寫說要用兩種不同的solution (for cartilage) : 試試看找一些相關的paper, 應該可以找到作者群是用哪種方式的囉~~ : 加油~ 那我可以再問細節一點的問題嗎? 1.你用1mg/ml pronase處理過 還需要用煮的方法做antigne retrieval嗎? 2.我後來其實有用acetone加H2O2去做antigen retrieval (某篇paper寫的) 然而我很懷疑這樣真的能夠retrieval~雖然我染出來感覺有點出來。 但是真的好淡好淡 想問A大用的方法染出來就會很明顯嗎? 3.另外就是我的脫鈣用的是commercial 的脫鈣液，並不是自己泡的EDTA， 不知道這樣會不會影響貼片呢?因為大部分的paper是寫EDTA脫鈣? 最後 很感謝A大~我以為這篇文章應該就會被埋沒起來了~結果又來了一道曙光 希望這次真的能夠克服掉片問題~ --

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