※ 引述《alicialai (Fairy Monster)》之铭言： : ※ 引述《hchung (hiflypig)》之铭言： : : 骨头是用石蜡包埋切7 um : : 再用commercial的玻片贴片 : : 接着用trisodium citrate dihydrate 配antigen retrival solution : : pH6.0 : : 用 hot plate加热到95C : : 不过 我们同时放入骨头跟大脑的石蜡切片 : : 只有骨头掉下来... : : 不知道为什麽 : : try了好几次都这样 : : 大概在70度就飘片了 : : 不知道板上的大家有什麽 : 骨头的切片不是很适合用煮的方式, : 因为硬度的关系, 即便你脱钙脱得非常完全, : 在切片的时候切到wax and bone交界的时候还是会卡卡的, : 这很容易造成一切看不到的连展片後也看不到的小皱摺~ : 这是造成浮片的主因.. 我那时候已经用到最贵最好的coating玻片, : 只要一煮照样浮.. : 後来是改用1mg/ml Pronase在37度处理30min就不会浮了, : 但是Retrival的方式depends on你的抗体抗原喔, : 我那时候从trypsin到用煮的用酸的pepsin用commercial的.. : 甚麽方法都试过了, 还有paper写说要用两种不同的solution (for cartilage) : 试试看找一些相关的paper, 应该可以找到作者群是用哪种方式的罗~~ : 加油~ 那我可以再问细节一点的问题吗? 1.你用1mg/ml pronase处理过 还需要用煮的方法做antigne retrieval吗? 2.我後来其实有用acetone加H2O2去做antigen retrieval (某篇paper写的) 然而我很怀疑这样真的能够retrieval~虽然我染出来感觉有点出来。 但是真的好淡好淡 想问A大用的方法染出来就会很明显吗? 3.另外就是我的脱钙用的是commercial 的脱钙液，并不是自己泡的EDTA， 不知道这样会不会影响贴片呢?因为大部分的paper是写EDTA脱钙? 最後 很感谢A大~我以为这篇文章应该就会被埋没起来了~结果又来了一道曙光 希望这次真的能够克服掉片问题~ --

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