作者McRay (MADAO)
看板Biotech
標題Re: [求救] SDS PAGE完全沒有band 除了marker
時間Sun Feb 27 18:57:07 2011
1. Check 上層與下層緩衝液的酸鹼值
2. CB染色在能看到的範圍，蛋白量至少需要1 microgram
3. destain是不是過久了
4. 沒有蛋白表現(作一個WELL當正控制組)
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◆ From: 223.139.52.74
※ 編輯: McRay 來自: 223.139.52.74 (02/27 18:58)
※ 編輯: McRay 來自: 223.139.52.74 (02/27 18:58)
1F：→ dovuwa:謝謝你回應我~destain剛配不久且其他人也用同一罐destain 02/27 19:23
2F：→ dovuwa:應該是不會有問題 我用了不同時期做的同一個clone 02/27 19:24
3F：→ dovuwa:做出的蛋白做過positive control但是連positive control都 02/27 19:25
4F：→ dovuwa:不見了~所以我才覺得很困擾 02/27 19:26
5F：→ dovuwa:請問上下膠緩衝液酸鹼值會影響他完全都空白(樣品)的結果嗎 02/27 19:28
6F：→ McRay:整條都空白就是系統有問題 酸鹼值影響Glycine/Tricine電性 02/27 21:03
7F：→ McRay:Check protocol 重配所有的緩衝液與sample buffer 02/27 21:06
8F：推 bluep:load BSA in one of the well... 02/28 00:02
9F：→ trumpet:原po不是有說marker有染到? 02/28 17:13
10F：推 yaliu:marker應該是pre-stain的吧～ 03/02 11:59
11F：→ yaliu:你的dye跟sample buffer是加一起的？如果marker跑正常有出來 03/02 12:01
12F：→ yaliu:表示電泳系統沒問題吧～你那個positive之前有跑過沒問題嗎？ 03/02 12:02
13F：推 huhu126:denature 真的有點久. sample的pH值可能已經偏掉了 03/02 15:17
14F：→ huhu126:lane是空的就是沒有protein,所以一是 buffer有問題 03/02 15:18
15F：→ huhu126:另一個是protein degradation.也許先確定不是這兩個問題再 03/02 15:19
16F：推 johnnyno1:MARKER正常表示你蛋白質樣品有問題,可能沒表現或是降解 03/03 17:36
17F：→ johnnyno1:掉了 或是蛋白質總量低於CBR的偵測極限 03/03 17:37