作者McRay (MADAO)
看板Biotech
标题Re: [求救] SDS PAGE完全没有band 除了marker
时间Sun Feb 27 18:57:07 2011
1. Check 上层与下层缓冲液的酸硷值
2. CB染色在能看到的范围，蛋白量至少需要1 microgram
3. destain是不是过久了
4. 没有蛋白表现(作一个WELL当正控制组)
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◆ From: 223.139.52.74
※ 编辑: McRay 来自: 223.139.52.74 (02/27 18:58)
※ 编辑: McRay 来自: 223.139.52.74 (02/27 18:58)
1F：→ dovuwa:谢谢你回应我~destain刚配不久且其他人也用同一罐destain 02/27 19:23
2F：→ dovuwa:应该是不会有问题 我用了不同时期做的同一个clone 02/27 19:24
3F：→ dovuwa:做出的蛋白做过positive control但是连positive control都 02/27 19:25
4F：→ dovuwa:不见了~所以我才觉得很困扰 02/27 19:26
5F：→ dovuwa:请问上下胶缓冲液酸硷值会影响他完全都空白(样品)的结果吗 02/27 19:28
6F：→ McRay:整条都空白就是系统有问题 酸硷值影响Glycine/Tricine电性 02/27 21:03
7F：→ McRay:Check protocol 重配所有的缓冲液与sample buffer 02/27 21:06
8F：推 bluep:load BSA in one of the well... 02/28 00:02
9F：→ trumpet:原po不是有说marker有染到? 02/28 17:13
10F：推 yaliu:marker应该是pre-stain的吧～ 03/02 11:59
11F：→ yaliu:你的dye跟sample buffer是加一起的？如果marker跑正常有出来 03/02 12:01
12F：→ yaliu:表示电泳系统没问题吧～你那个positive之前有跑过没问题吗？ 03/02 12:02
13F：推 huhu126:denature 真的有点久. sample的pH值可能已经偏掉了 03/02 15:17
14F：→ huhu126:lane是空的就是没有protein,所以一是 buffer有问题 03/02 15:18
15F：→ huhu126:另一个是protein degradation.也许先确定不是这两个问题再 03/02 15:19
16F：推 johnnyno1:MARKER正常表示你蛋白质样品有问题,可能没表现或是降解 03/03 17:36
17F：→ johnnyno1:掉了 或是蛋白质总量低於CBR的侦测极限 03/03 17:37