作者nk12914 (等待)
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標題[討論] shLuc的細胞可拿來做luciferase的reporter assay嗎?
時間Sat Feb 26 14:59:50 2011
目前用的knckdown方式是中研院lentivirus的系統
因為實驗需要做到reporter assay
在review時被committee質疑control組的shLuc應該不能拿來做lucifesrase的reporter
理由是shLuc細胞會一直做出shRNA然後影像到reporter的結果
只是想一想還是覺得很奇怪
reporter實驗中的luciferase蛋白是由前面的promoter和其TF所轉錄的
這樣的話shLuc所製造的shRNA會影響到嗎?
還是說如果shLuc所製造的shRNA若是target位置在coding region才會受影響?
因為有點confused，想請問有這方面的經驗的大家可以提供些意見
若是真的會對reporter有差，想再請問有其他的knockdown control嗎?
謝謝!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.55.135
1F：→ blence:一般來說.shXXX就是指knockdown XXX的shRNA vector阿 02/26 15:05
2F：推 icome:shLuc會摧毀luc mRNA 這樣你的冷光訊號不就一直都很弱? 02/26 15:13
3F：推 williamyang:還有shGFP或是scramble shRNA. 02/26 16:02
4F：推 kaifish:鄭金松博士曾解釋過，shLuc的序列只是小鼠的一段DNA 02/26 16:30
5F：→ kaifish:並非真的Luciferase的shRNA，當初只是為了方便命名而已 02/26 16:31
6F：→ blence:要這麼說請提出證據不然會造成誤導，網頁上常見問題以及使 02/26 17:08
7F：→ blence:用者發表都提到pLKO-shLuc是含target luciferase的shRNA 02/26 17:11
8F：→ ethle:shLacz 可以當control 02/26 17:27
9F：→ harry:鄭博士那樣解釋，實在是...... 02/26 18:06
10F：→ nk12914:補充一下，我曾經拿wild type細胞跟已經infection過shLuc 02/26 23:51
11F：→ nk12914:的細胞去做reporter，可是我兩個組別的luciferase real值 02/26 23:52
12F：→ nk12914:幾乎沒什麼差，且換算完的RLU也沒啥差異。甚至有時shLuc組 02/26 23:54
13F：→ nk12914:的RLU還會稍微略高於wild type組，所以看起來冷光值並未如 02/26 23:55
14F：→ nk12914:icome大說的都很弱耶 =.=a 02/26 23:55
15F：推 icome:網頁上提供的資訊確實是KD firely luciferase...這... 02/27 10:39
16F：推 FENOR:不行吧，Luc assay很敏感，差一點可以差很多 02/27 17:07
17F：推 k879311:如果實驗重複好幾次shLuc都沒效，或許是shLuc設計上的問題 03/02 00:52
18F：→ k879311:很多實驗室也有訂，據我所知沒有遇過這樣的問題，建議你 03/02 00:59
19F：→ k879311:先確認所使用的確定是shLuc，或許定個序吧沒多少錢 03/02 01:00
20F：→ k879311:話說回來設計上有問題機率很小，因為會有很多使用者反映 03/02 01:11