作者nk12914 (等待)
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标题[讨论] shLuc的细胞可拿来做luciferase的reporter assay吗?
时间Sat Feb 26 14:59:50 2011
目前用的knckdown方式是中研院lentivirus的系统
因为实验需要做到reporter assay
在review时被committee质疑control组的shLuc应该不能拿来做lucifesrase的reporter
理由是shLuc细胞会一直做出shRNA然後影像到reporter的结果
只是想一想还是觉得很奇怪
reporter实验中的luciferase蛋白是由前面的promoter和其TF所转录的
这样的话shLuc所制造的shRNA会影响到吗?
还是说如果shLuc所制造的shRNA若是target位置在coding region才会受影响?
因为有点confused，想请问有这方面的经验的大家可以提供些意见
若是真的会对reporter有差，想再请问有其他的knockdown control吗?
谢谢!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.45.55.135
1F：→ blence:一般来说.shXXX就是指knockdown XXX的shRNA vector阿 02/26 15:05
2F：推 icome:shLuc会摧毁luc mRNA 这样你的冷光讯号不就一直都很弱? 02/26 15:13
3F：推 williamyang:还有shGFP或是scramble shRNA. 02/26 16:02
4F：推 kaifish:郑金松博士曾解释过，shLuc的序列只是小鼠的一段DNA 02/26 16:30
5F：→ kaifish:并非真的Luciferase的shRNA，当初只是为了方便命名而已 02/26 16:31
6F：→ blence:要这麽说请提出证据不然会造成误导，网页上常见问题以及使 02/26 17:08
7F：→ blence:用者发表都提到pLKO-shLuc是含target luciferase的shRNA 02/26 17:11
8F：→ ethle:shLacz 可以当control 02/26 17:27
9F：→ harry:郑博士那样解释，实在是...... 02/26 18:06
10F：→ nk12914:补充一下，我曾经拿wild type细胞跟已经infection过shLuc 02/26 23:51
11F：→ nk12914:的细胞去做reporter，可是我两个组别的luciferase real值 02/26 23:52
12F：→ nk12914:几乎没什麽差，且换算完的RLU也没啥差异。甚至有时shLuc组 02/26 23:54
13F：→ nk12914:的RLU还会稍微略高於wild type组，所以看起来冷光值并未如 02/26 23:55
14F：→ nk12914:icome大说的都很弱耶 =.=a 02/26 23:55
15F：推 icome:网页上提供的资讯确实是KD firely luciferase...这... 02/27 10:39
16F：推 FENOR:不行吧，Luc assay很敏感，差一点可以差很多 02/27 17:07
17F：推 k879311:如果实验重复好几次shLuc都没效，或许是shLuc设计上的问题 03/02 00:52
18F：→ k879311:很多实验室也有订，据我所知没有遇过这样的问题，建议你 03/02 00:59
19F：→ k879311:先确认所使用的确定是shLuc，或许定个序吧没多少钱 03/02 01:00
20F：→ k879311:话说回来设计上有问题机率很小，因为会有很多使用者反映 03/02 01:11