作者sitting200 (sitting)
看板Biotech
標題[求救] Hela怎麼養都養不起來>"<
時間Fri Feb 18 14:09:17 2011
我家的HeLa一直養不起來>"<
每次到養到第三天就會開始有一大堆的死細胞飄起來(應該)
一開始以為是medium汙染,test後確認medium沒有汙染
在前一代凍細胞時,因為incubator不穩定所以健康狀況好像就不太好了...
現在incubator修好了,可是還是養不起T^T
我家medium是DMEM+10%FBS+0.1%getamicin
不知道大家能不能給我一點意見呢>"<
細胞在養不起來我就畢不了業了T^T
謝謝大家
※ 編輯: sitting200 來自: 140.114.97.178 (02/18 14:10)
1F：推 iceking:汙染的可能性很大,因為HeLa相當好養~ test凍起來的細胞 02/18 14:17
2F：推 pwl:microplasma contamination? 02/18 14:18
3F：→ iceking:凍細胞&解凍細胞的過程有正確嗎? 02/18 14:19
4F：→ iceking:黴醬菌應該不會讓細胞大量死亡~ 02/18 14:20
5F：推 aceliang:"myco"plasma 02/18 14:49
6F：推 aceliang:要不要試試別加Gentamicin? 02/18 14:52
7F：→ sitting200:凍細胞我是先將離心完的cell用medium 懸浮後加5%DMSO 02/18 16:52
8F：→ sitting200:解凍時我是從液態氮拿出來後,直接放37度水浴槽解凍 02/18 16:53
9F：→ sitting200:然後加新的medium 10ml去洗DMSO,離心後再加新的10ml 02/18 16:56
10F：→ sitting200:全部都加到dish裡養~ 02/18 16:57
11F：→ sitting200:目前都是在試凍起來的細胞,正打算試試不加gentamicin 02/18 16:58
12F：推 iceking:解凍過程看起來沒甚麼問題,如果不是汙染的話,可能是因為 02/18 17:09
13F：→ iceking:凍起來的細胞本身就不太好,經過解凍後太虛弱而死亡~ 02/18 17:09
14F：→ iceking:可以試看看解凍別批較健康的細胞~ 02/18 17:10
15F：→ iceking:不過你說第三天才開始死亡..@@ 你還是應該先測試是否汙染? 02/18 17:12
16F：→ sitting200:那大概要測哪一些汙染呢??因為這一批是第一批凍管= =a 02/18 17:57
17F：→ sitting200:所以完全沒有其他批凍管T.T 02/18 17:58
18F：推 icome: DMSO水溶會放熱 DMSO要先和medium混好才能懸浮細胞 02/18 18:14
19F：推 oplz:HeLa 就跟別的 lab 要來養看看就知道是不是你的問題了 02/18 23:46
20F：→ sitting200:恩恩~謝謝各位幫忙,我會再跟其他實驗室借HeLa試試 02/20 01:59