作者sitting200 (sitting)
看板Biotech
标题[求救] Hela怎麽养都养不起来>"<
时间Fri Feb 18 14:09:17 2011
我家的HeLa一直养不起来>"<
每次到养到第三天就会开始有一大堆的死细胞飘起来(应该)
一开始以为是medium污染,test後确认medium没有污染
在前一代冻细胞时,因为incubator不稳定所以健康状况好像就不太好了...
现在incubator修好了,可是还是养不起T^T
我家medium是DMEM+10%FBS+0.1%getamicin
不知道大家能不能给我一点意见呢>"<
细胞在养不起来我就毕不了业了T^T
谢谢大家
※ 编辑: sitting200 来自: 140.114.97.178 (02/18 14:10)
1F：推 iceking:污染的可能性很大,因为HeLa相当好养~ test冻起来的细胞 02/18 14:17
2F：推 pwl:microplasma contamination? 02/18 14:18
3F：→ iceking:冻细胞&解冻细胞的过程有正确吗? 02/18 14:19
4F：→ iceking:霉酱菌应该不会让细胞大量死亡~ 02/18 14:20
5F：推 aceliang:"myco"plasma 02/18 14:49
6F：推 aceliang:要不要试试别加Gentamicin? 02/18 14:52
7F：→ sitting200:冻细胞我是先将离心完的cell用medium 悬浮後加5%DMSO 02/18 16:52
8F：→ sitting200:解冻时我是从液态氮拿出来後,直接放37度水浴槽解冻 02/18 16:53
9F：→ sitting200:然後加新的medium 10ml去洗DMSO,离心後再加新的10ml 02/18 16:56
10F：→ sitting200:全部都加到dish里养~ 02/18 16:57
11F：→ sitting200:目前都是在试冻起来的细胞,正打算试试不加gentamicin 02/18 16:58
12F：推 iceking:解冻过程看起来没甚麽问题,如果不是污染的话,可能是因为 02/18 17:09
13F：→ iceking:冻起来的细胞本身就不太好,经过解冻後太虚弱而死亡~ 02/18 17:09
14F：→ iceking:可以试看看解冻别批较健康的细胞~ 02/18 17:10
15F：→ iceking:不过你说第三天才开始死亡..@@ 你还是应该先测试是否污染? 02/18 17:12
16F：→ sitting200:那大概要测哪一些污染呢??因为这一批是第一批冻管= =a 02/18 17:57
17F：→ sitting200:所以完全没有其他批冻管T.T 02/18 17:58
18F：推 icome: DMSO水溶会放热 DMSO要先和medium混好才能悬浮细胞 02/18 18:14
19F：推 oplz:HeLa 就跟别的 lab 要来养看看就知道是不是你的问题了 02/18 23:46
20F：→ sitting200:恩恩~谢谢各位帮忙,我会再跟其他实验室借HeLa试试 02/20 01:59