作者goldfish0909 (金魚)
看板Biotech
標題[討論] 農桿菌生化檢測相關及水稻種子 RNA 純化問題~~
時間Fri Feb 11 11:22:44 2011
各位版上的前輩們好
小弟我在實驗上遇到一些問題，想請教一下大家，問題敘述如下：
一、農桿菌生化檢測
挑取生長在 YEP (5 ppm rifampicin) EHA105 單一菌落，培養至 Lactose agar (
1% lactose, 0.1% Yeast extract, 2% agar)，以本氏液 (50 mM CuSO4.5H2O, 0.5M
sodium citrate dihydrate, 0.9 M Na2CO3) 檢測。在 lactose agar 上分成四區劃
不同管 stock 菌液，每一區以 100 ul 本氏液染色，但在菌體周圍無看到黃色環帶
不曉得是哪裡出了問題? 還是哪位大大有照片提供給我參考一下
二、成熟水稻種子 RNA 純化
我是用 5 顆成熟種子以液態氮磨成粉末，加入 1 mL TRIzol 混合，再加入 200 ul
氯仿，以 13000 rpm 離心 15 分鐘，發現種子所含澱粉吸水膨脹，完全無上清液可
取用，請有經驗的大大們提供一下辦法，感激不盡~~
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◆ From: 140.130.87.210
1F：→ nike77114:你先看一下你自己配的本氏液是不是正常(用糖去測) 02/11 15:47
2F：→ nike77114:如果正常,那可能就是菌活性不好or根本不是Agrobacterium 02/11 15:48
3F：→ nike77114:以我來說我畫完線養overnight,滴入本氏液30min就很明顯 02/11 15:50
4F：→ nike77114:黃色了 02/11 15:50
5F：→ goldfish0909:感謝樓上建議 ^^ 02/11 21:25
6F：→ hurdle:沒試過TRIzol,不過以前用QIAGEN抽的時候..要把Sample保持 02/13 13:20
7F：→ hurdle:在低溫中, 離心的時候也是~~~ 02/13 13:22
8F：推 kingbar:第一部分我的經驗是"菌落"本身會變黃色,可以保留一部分 02/14 00:21
9F：→ kingbar:菌落不要被本式液附蓋,來對照顏色是否變化 02/14 00:22
10F：→ kingbar:第二部分我是習慣加入TRIzol混合後,離心取上清液, 02/14 00:24
11F：→ kingbar:再於上清液中加入氯仿混合,你可以試試看 02/14 00:28
12F：→ goldfish0909:謝謝k大提供建議 ^^ 02/15 22:06
13F：→ goldfish0909:謝謝 h 大提供建議 ^^ 02/15 22:07