作者goldfish0909 (金鱼)
看板Biotech
标题[讨论] 农杆菌生化检测相关及水稻种子 RNA 纯化问题~~
时间Fri Feb 11 11:22:44 2011
各位版上的前辈们好
小弟我在实验上遇到一些问题，想请教一下大家，问题叙述如下：
一、农杆菌生化检测
挑取生长在 YEP (5 ppm rifampicin) EHA105 单一菌落，培养至 Lactose agar (
1% lactose, 0.1% Yeast extract, 2% agar)，以本氏液 (50 mM CuSO4.5H2O, 0.5M
sodium citrate dihydrate, 0.9 M Na2CO3) 检测。在 lactose agar 上分成四区划
不同管 stock 菌液，每一区以 100 ul 本氏液染色，但在菌体周围无看到黄色环带
不晓得是哪里出了问题? 还是哪位大大有照片提供给我参考一下
二、成熟水稻种子 RNA 纯化
我是用 5 颗成熟种子以液态氮磨成粉末，加入 1 mL TRIzol 混合，再加入 200 ul
氯仿，以 13000 rpm 离心 15 分钟，发现种子所含淀粉吸水膨胀，完全无上清液可
取用，请有经验的大大们提供一下办法，感激不尽~~
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.87.210
1F：→ nike77114:你先看一下你自己配的本氏液是不是正常(用糖去测) 02/11 15:47
2F：→ nike77114:如果正常,那可能就是菌活性不好or根本不是Agrobacterium 02/11 15:48
3F：→ nike77114:以我来说我画完线养overnight,滴入本氏液30min就很明显 02/11 15:50
4F：→ nike77114:黄色了 02/11 15:50
5F：→ goldfish0909:感谢楼上建议 ^^ 02/11 21:25
6F：→ hurdle:没试过TRIzol,不过以前用QIAGEN抽的时候..要把Sample保持 02/13 13:20
7F：→ hurdle:在低温中, 离心的时候也是~~~ 02/13 13:22
8F：推 kingbar:第一部分我的经验是"菌落"本身会变黄色,可以保留一部分 02/14 00:21
9F：→ kingbar:菌落不要被本式液附盖,来对照颜色是否变化 02/14 00:22
10F：→ kingbar:第二部分我是习惯加入TRIzol混合後,离心取上清液, 02/14 00:24
11F：→ kingbar:再於上清液中加入氯仿混合,你可以试试看 02/14 00:28
12F：→ goldfish0909:谢谢k大提供建议 ^^ 02/15 22:06
13F：→ goldfish0909:谢谢 h 大提供建议 ^^ 02/15 22:07