作者spirithorse (咩)
看板Biotech
標題[求救]cell line染IHC顏色很淡 (用AEC染)
時間Wed Jan 19 23:04:25 2011
我的實驗是要染C2C12的MHC
1-4% paraformadehyde fix 15 mins
2-NH4Cl 15 mins
3-2% Triton X-100 O/N
4-blocking (2% goat serum+ 2% BSA) 15mins
5-一抗 MHC O/N (溶在blocking solution) 1:500
6-二抗 anti-mouse IgG HRP 1:250 (in b;ocking solution)
7-AEC 避光15 mins (20X AEC dilute到1x)
8-用水洗淨後,染hematoxin 避光20 mins
9-用水洗淨後,保存在PBS理
=====我的問題是,MHC都不紅 顏色很淡====
老師有叫我在AEC裡面加H2O2, 很可惜我那時後急著要做實驗,忘了加
請問有加過的學長姐,大概要加多少?
有圖有真相 :
http://ppt.cc/S9yc 這是我做的
http://ppt.cc/qyvp 這是學姐做的
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.73
※ 編輯: spirithorse 來自: 140.115.48.73 (01/19 23:08)
1F：→ vandia:H2O2不是最開始的時候先treat過的嘛? 3% in MeOH 01/24 15:15
2F：→ spirithorse:謝謝,後來我也有在先處理過3% H2O2但結果還是染不到 01/25 01:05