作者spirithorse (咩)
看板Biotech
标题[求救]cell line染IHC颜色很淡 (用AEC染)
时间Wed Jan 19 23:04:25 2011
我的实验是要染C2C12的MHC
1-4% paraformadehyde fix 15 mins
2-NH4Cl 15 mins
3-2% Triton X-100 O/N
4-blocking (2% goat serum+ 2% BSA) 15mins
5-一抗 MHC O/N (溶在blocking solution) 1:500
6-二抗 anti-mouse IgG HRP 1:250 (in b;ocking solution)
7-AEC 避光15 mins (20X AEC dilute到1x)
8-用水洗净後,染hematoxin 避光20 mins
9-用水洗净後,保存在PBS理
=====我的问题是,MHC都不红 颜色很淡====
老师有叫我在AEC里面加H2O2, 很可惜我那时後急着要做实验,忘了加
请问有加过的学长姐,大概要加多少?
有图有真相 :
http://ppt.cc/S9yc 这是我做的
http://ppt.cc/qyvp 这是学姐做的
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.115.48.73
※ 编辑: spirithorse 来自: 140.115.48.73 (01/19 23:08)
1F：→ vandia:H2O2不是最开始的时候先treat过的嘛? 3% in MeOH 01/24 15:15
2F：→ spirithorse:谢谢,後来我也有在先处理过3% H2O2但结果还是染不到 01/25 01:05