作者sanjijijiji (8 8 )
看板Biotech
標題[求救] PCR出現奇怪的問題
時間Wed Jan 19 12:02:39 2011
最近RT-PCR出現奇怪的現象
實驗的流程是
先加RNA polymerase inhibitor 放置 0,2,4小時後
用TRIZOL抽出total RNA
再用MMLV 轉成cDNA
之後用takara 的pcr mix與gapdh的primer進行pcr
gapdh 是做為control用
但是實驗的結果很奇怪
2和4小時的gapdh都有pcr產物
但是0小時的產物卻很少很少
這個實驗已經重複兩次 都是這樣的結果
實驗結果連結:
http://upldi.eu/bdgsb2
之前懷疑是因為ethanol沒有去除乾淨
所以這次air dry至30min 確定沒有酒精殘留後
再用DEPC水 回溶
這次的RNA都是同一次抽的 cDNA也是一起轉的
而且0小時的點還是沒加藥的 應該是沒有藥物的影響
希望板上的前輩們能給點意見~
謝謝
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◆ From: 140.128.194.198
1F：推 miaw:你抽完RNA有先測一下OD或是跑RNA gel看看嗎? 01/23 16:39
2F：→ miaw:會不會一開始那個sample抽出來量就不多? 01/23 16:39