作者sanjijijiji (8 8 )
看板Biotech
标题[求救] PCR出现奇怪的问题
时间Wed Jan 19 12:02:39 2011
最近RT-PCR出现奇怪的现象
实验的流程是
先加RNA polymerase inhibitor 放置 0,2,4小时後
用TRIZOL抽出total RNA
再用MMLV 转成cDNA
之後用takara 的pcr mix与gapdh的primer进行pcr
gapdh 是做为control用
但是实验的结果很奇怪
2和4小时的gapdh都有pcr产物
但是0小时的产物却很少很少
这个实验已经重复两次 都是这样的结果
实验结果连结:
http://upldi.eu/bdgsb2
之前怀疑是因为ethanol没有去除乾净
所以这次air dry至30min 确定没有酒精残留後
再用DEPC水 回溶
这次的RNA都是同一次抽的 cDNA也是一起转的
而且0小时的点还是没加药的 应该是没有药物的影响
希望板上的前辈们能给点意见~
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.194.198
1F：推 miaw:你抽完RNA有先测一下OD或是跑RNA gel看看吗? 01/23 16:39
2F：→ miaw:会不会一开始那个sample抽出来量就不多? 01/23 16:39