作者waitingu (Phil-Ku)
看板Biotech
標題[討論] Membrane protein extraction方法(300P幣)
時間Mon Jan 10 16:44:02 2011
最近的實驗必須要看
non-receptor tyrosine kinase在不同條件下被recruit到membrane的情形
閱讀了一些期刊後發現，普遍的做法是用Triton X-100 + sucrose gradient分層
此作法通常需要超高速離心
但好像也有一種做法是用Triton X-114去做分層，但不需要超高速離心
(由於老師一直恐嚇說如果超高速離心沒處理好，會提早畢業但沒證書，因此能儘量不用
就不用那台老機器)，因此...
1. 想請問一下，這兩種做法的差異性在哪？
2. 如果是Triton X-114這種做法，所看到的分層現象，應該是
(上層) 水層 (中間)Sucrose cashion (下層)detergent phase
還是順序有所差別呢？
3. 我試了幾次 Triton X-114作法
發現可以抽出membrane-associated protein (例如Rho)
但SDS-PAGE跑出來的band卻會smear(如圖
http://img545.imageshack.us/f/25531824.jpg/右邊那條)
推測可能是detergent含量太多，但如果用Acetone沉澱後，蛋白會無法回溶
請問版友們對去除detergent步驟是否有好的建議？
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◆ From: 140.112.121.97
※ 編輯: waitingu 來自: 140.112.121.97 (01/10 16:48)
1F：→ a001ou:超高速離心用稱確定平衡的話沒這麼危險吧 01/10 23:32
2F：→ keeny:去Fisher Scientific 買kit分離 01/14 11:39