作者waitingu (Phil-Ku)
看板Biotech
标题[讨论] Membrane protein extraction方法(300P币)
时间Mon Jan 10 16:44:02 2011
最近的实验必须要看
non-receptor tyrosine kinase在不同条件下被recruit到membrane的情形
阅读了一些期刊後发现，普遍的做法是用Triton X-100 + sucrose gradient分层
此作法通常需要超高速离心
但好像也有一种做法是用Triton X-114去做分层，但不需要超高速离心
(由於老师一直恐吓说如果超高速离心没处理好，会提早毕业但没证书，因此能尽量不用
就不用那台老机器)，因此...
1. 想请问一下，这两种做法的差异性在哪？
2. 如果是Triton X-114这种做法，所看到的分层现象，应该是
(上层) 水层 (中间)Sucrose cashion (下层)detergent phase
还是顺序有所差别呢？
3. 我试了几次 Triton X-114作法
发现可以抽出membrane-associated protein (例如Rho)
但SDS-PAGE跑出来的band却会smear(如图
http://img545.imageshack.us/f/25531824.jpg/右边那条)
推测可能是detergent含量太多，但如果用Acetone沉淀後，蛋白会无法回溶
请问版友们对去除detergent步骤是否有好的建议？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
※ 编辑: waitingu 来自: 140.112.121.97 (01/10 16:48)
1F：→ a001ou:超高速离心用称确定平衡的话没这麽危险吧 01/10 23:32
2F：→ keeny:去Fisher Scientific 买kit分离 01/14 11:39