作者keepseaching (絕心忘情)
看板Biotech
標題[求救] 農桿菌transform
時間Sat Jan 8 22:08:07 2011
最近在進行將一個construct好的plasmid
利用電穿孔的方式轉入農桿菌
之後在進行植物的感染
但是
作幾次下來
plate上確實會長出colony
第一次挑菌作colony PCR可以做出我要的band
但是之後再把同樣的菌落拿去塗盤
長出的colony卻無法PCR出我要的band
這就表示那顆菌落是假的
我一次大概都會挑十幾顆來check
但是卻都無法挑到正確的colony
基本上我已經將所有可能污染的因素排除
但仍是一樣的結果
請問版上有版友遇過類似的情形嗎
P.S. 我用的抗生素是kanamycin
vector是pCambia2300
農桿菌的品系是LBA4404
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.35.25.28
1F：推 Ianthegood:都是做colony PCR嗎? 電穿孔的condition有調過嗎? 01/09 20:06
2F：→ Ianthegood:PCR是雜band還是沒band? 01/09 20:07
3F：→ keepseaching:電穿孔的condition沒啥問題 PCR是沒有band 01/09 21:08
4F：推 Ianthegood:用pCambia上面的primer site試試看? sequence看看 01/10 06:11
5F：→ Ianthegood:會不會是運氣太好double cross out出來了XD 01/10 06:12
6F：推 shunze:這種事我都還沒發生過ㄟ...你抗生素有加兩種嗎？ 01/17 13:25
7F：→ shunze:LBA4404內還有一個抗生素的篩選基因... 01/17 13:27
8F：→ tw00058329:多加個Streptomycin篩篩看吧 01/27 14:39