作者keepseaching (绝心忘情)
看板Biotech
标题[求救] 农杆菌transform
时间Sat Jan 8 22:08:07 2011
最近在进行将一个construct好的plasmid
利用电穿孔的方式转入农杆菌
之後在进行植物的感染
但是
作几次下来
plate上确实会长出colony
第一次挑菌作colony PCR可以做出我要的band
但是之後再把同样的菌落拿去涂盘
长出的colony却无法PCR出我要的band
这就表示那颗菌落是假的
我一次大概都会挑十几颗来check
但是却都无法挑到正确的colony
基本上我已经将所有可能污染的因素排除
但仍是一样的结果
请问版上有版友遇过类似的情形吗
P.S. 我用的抗生素是kanamycin
vector是pCambia2300
农杆菌的品系是LBA4404
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.35.25.28
1F：推 Ianthegood:都是做colony PCR吗? 电穿孔的condition有调过吗? 01/09 20:06
2F：→ Ianthegood:PCR是杂band还是没band? 01/09 20:07
3F：→ keepseaching:电穿孔的condition没啥问题 PCR是没有band 01/09 21:08
4F：推 Ianthegood:用pCambia上面的primer site试试看? sequence看看 01/10 06:11
5F：→ Ianthegood:会不会是运气太好double cross out出来了XD 01/10 06:12
6F：推 shunze:这种事我都还没发生过ㄟ...你抗生素有加两种吗？ 01/17 13:25
7F：→ shunze:LBA4404内还有一个抗生素的筛选基因... 01/17 13:27
8F：→ tw00058329:多加个Streptomycin筛筛看吧 01/27 14:39