作者Bluegnga (藍)
看板Biotech
標題[求救] 免疫螢光的步驟
時間Mon Dec 20 23:33:06 2010
目前我在做血色素的螢光反應
我的一抗是rabbit 二抗是goat的
想請問大家一抗二抗的濃度大家一般都是怎麼配的呢?
還有BSA做blocking,我看BSA溶液約在2-5%
不過我是買粉狀的BSA 想請問2-5%是怎樣的算法?
另外我看在做抗體反應時 有些是寫放在室溫 有些則寫放在約37度
我想抗體是動物血清中萃取出的
是否放在溫度較近於體溫的溫度活性會比較高呢?
然後用PBS沖洗完應該要怎麼用乾呢?用氮氣吹還是用無塵紙吸乾呢?
還有曝光時間有比較推薦的嗎?
不好意思 因為不是生物相關科系
所以可能問得比較基本
不過我查資料蠻多版本的 所以想來請教看看
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◆ From: 140.116.177.186
1F：推 spirithorse:blocking solution:2% goat serum+2% BSA,就秤你要體 12/23 22:55
2F：→ spirithorse:積X 0.02=克數嚕! 反應我都是在4度O/N,PBS用試鏡紙 12/23 23:06
3F：→ spirithorse:吸掉邊邊的水就好,拍照曝光是1.5s(Alexa488) 12/23 23:06
4F：→ spirithorse:不好意思,O/N是一抗,二抗是3小時室溫 12/23 23:07
5F：推 mzac1b:我想有兩個概念原PO比較不知道的... 12/24 10:04
6F：→ mzac1b:1. 染色過程到結束都不能讓樣品"乾掉" 以免破壞蛋白質 12/24 10:05
7F：→ mzac1b:所以任何沖洗過程作用只是在稀釋沖淡 12/24 10:06
8F：→ mzac1b:2. 一般建議抗體作用是4 度0/N 或室溫作用 12/24 10:10
9F：→ mzac1b:曝光時間則是隨鏡頭倍數不同 汞燈強弱 抗體作用程度而異 12/24 10:13
10F：→ mzac1b:並不一定 0.5秒到十秒都可能 最好有確定染得到的東西 12/24 10:14
11F：→ mzac1b:也就是positive control 才能斷定到底有沒有染到 12/24 10:14
12F：→ vandia:原po實驗室沒有詳細protocol可以看嘛? 12/24 12:43