作者Bluegnga (蓝)
看板Biotech
标题[求救] 免疫萤光的步骤
时间Mon Dec 20 23:33:06 2010
目前我在做血色素的萤光反应
我的一抗是rabbit 二抗是goat的
想请问大家一抗二抗的浓度大家一般都是怎麽配的呢?
还有BSA做blocking,我看BSA溶液约在2-5%
不过我是买粉状的BSA 想请问2-5%是怎样的算法?
另外我看在做抗体反应时 有些是写放在室温 有些则写放在约37度
我想抗体是动物血清中萃取出的
是否放在温度较近於体温的温度活性会比较高呢?
然後用PBS冲洗完应该要怎麽用乾呢?用氮气吹还是用无尘纸吸乾呢?
还有曝光时间有比较推荐的吗?
不好意思 因为不是生物相关科系
所以可能问得比较基本
不过我查资料蛮多版本的 所以想来请教看看
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.177.186
1F：推 spirithorse:blocking solution:2% goat serum+2% BSA,就秤你要体 12/23 22:55
2F：→ spirithorse:积X 0.02=克数噜! 反应我都是在4度O/N,PBS用试镜纸 12/23 23:06
3F：→ spirithorse:吸掉边边的水就好,拍照曝光是1.5s(Alexa488) 12/23 23:06
4F：→ spirithorse:不好意思,O/N是一抗,二抗是3小时室温 12/23 23:07
5F：推 mzac1b:我想有两个概念原PO比较不知道的... 12/24 10:04
6F：→ mzac1b:1. 染色过程到结束都不能让样品"乾掉" 以免破坏蛋白质 12/24 10:05
7F：→ mzac1b:所以任何冲洗过程作用只是在稀释冲淡 12/24 10:06
8F：→ mzac1b:2. 一般建议抗体作用是4 度0/N 或室温作用 12/24 10:10
9F：→ mzac1b:曝光时间则是随镜头倍数不同 汞灯强弱 抗体作用程度而异 12/24 10:13
10F：→ mzac1b:并不一定 0.5秒到十秒都可能 最好有确定染得到的东西 12/24 10:14
11F：→ mzac1b:也就是positive control 才能断定到底有没有染到 12/24 10:14
12F：→ vandia:原po实验室没有详细protocol可以看嘛? 12/24 12:43