作者lovepurely (c )
看板Biotech
標題[求救] 常做不出結果
時間Mon Dec 20 02:17:30 2010
最近老師希望我做Gelatin Zymography的實驗，但是實驗結果成功機率幾乎只有二分之一。
我的實驗過程將電泳槽全程on ice，接著就是用renaturning buffer wash，每三十分鐘換一次，共wash兩次，
然後就是用wash buffer 每十分鐘換一次，最後就是uncubation buffer overnight，
可是有時候會有MMP-9,MMP-2 band出現，有時候又都不會出現，整片gel都是trypan blue
的藍色。這困擾我很久，每次操作手法都相同，但卻不能有一致的結果產生，可以有人幫
我解釋一下可能發生的問題嗎？
會跟tris base pH 8.8 OR pH 6.8 OR running buffer有關嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 112.104.22.116
1F：→ natual:trypan blue原來可以染zymoraphy.以前都是用Coomassie藍染 12/20 09:26
2F：推 nerdz:天氣多變化..更嚴謹一點你可以都在定溫的incubator裡面做 12/20 16:00
3F：→ nerdz:不過我猜最有可能是stain destain的問題 12/20 16:01
4F：推 ververia:development buffer現配，放在定溫37度C的incubator 12/21 11:45
5F：→ ververia:一開始我也跑不出MMP-9的band，後來buffer現配就都有出現 12/21 11:47