作者lovepurely (c )
看板Biotech
标题[求救] 常做不出结果
时间Mon Dec 20 02:17:30 2010
最近老师希望我做Gelatin Zymography的实验，但是实验结果成功机率几乎只有二分之一。
我的实验过程将电泳槽全程on ice，接着就是用renaturning buffer wash，每三十分钟换一次，共wash两次，
然後就是用wash buffer 每十分钟换一次，最後就是uncubation buffer overnight，
可是有时候会有MMP-9,MMP-2 band出现，有时候又都不会出现，整片gel都是trypan blue
的蓝色。这困扰我很久，每次操作手法都相同，但却不能有一致的结果产生，可以有人帮
我解释一下可能发生的问题吗？
会跟tris base pH 8.8 OR pH 6.8 OR running buffer有关吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 112.104.22.116
1F：→ natual:trypan blue原来可以染zymoraphy.以前都是用Coomassie蓝染 12/20 09:26
2F：推 nerdz:天气多变化..更严谨一点你可以都在定温的incubator里面做 12/20 16:00
3F：→ nerdz:不过我猜最有可能是stain destain的问题 12/20 16:01
4F：推 ververia:development buffer现配，放在定温37度C的incubator 12/21 11:45
5F：→ ververia:一开始我也跑不出MMP-9的band，後来buffer现配就都有出现 12/21 11:47