作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
標題[求救] luciferase reporter該在甚麼時候transfect進去呢?
時間Sun Dec 19 16:47:28 2010
小弟目前正在做ko某個gene對於ER stress的影響，
然後老師要我同時做luciferase assay。
目前的做法是:
Day1:transfect shRNA
Day2:換medium
Day3:送luciferase assay reporter進去(要看的不是被ko掉的gene)
Day4:換medium
Day5:lyse cells 拿去測
可是現在有個問題，在Day3的時候，有時細胞就已經長的頗多(高過六七成滿了。)
那我能不能在Day1的時候直接把要測的reporter一起送進去呢?
或者說在Day2送。
因為上次這樣做測出來的值相當的邪門，做為
consititutive active control的Renilla的值低到不可思議。
只有個位數或二十幾。
懇請建議
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.135.214
1F：→ bill90128:如果把 shRNA 和 repoter 同時transfect呢? 12/20 01:32
2F：推 johanjohan:推樓上...另外 會不會是day3再一次transfect的效率低? 12/20 09:59
3F：→ harry:renilla的promoter若為TK，以下面paper為例，會受影響 12/20 10:30
5F：推 iceking:順序顛倒,也就是先送reporter呢? 12/20 15:38
6F：→ FENOR:目前正在嘗試一起送 12/20 22:52
7F：推 iceking:話說我們家的pRL-TK也都讀不到值,害我都用其他方法做對照 12/21 11:29
8F：→ harry:如果不行的話，考慮一下CMV-RL 12/22 00:23
10F：推 bill90128:也可以考慮一下 transfection 時的細胞滿度。不同試劑 12/23 22:48
11F：→ bill90128:需要不同的細胞滿度才能達到最好效果。EX:lipo, CaPO4.. 12/23 22:49
12F：→ FENOR:最剛開始一起transfect進去看起來是reproducible 12/30 22:25