作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
标题[求救] luciferase reporter该在甚麽时候transfect进去呢?
时间Sun Dec 19 16:47:28 2010
小弟目前正在做ko某个gene对於ER stress的影响，
然後老师要我同时做luciferase assay。
目前的做法是:
Day1:transfect shRNA
Day2:换medium
Day3:送luciferase assay reporter进去(要看的不是被ko掉的gene)
Day4:换medium
Day5:lyse cells 拿去测
可是现在有个问题，在Day3的时候，有时细胞就已经长的颇多(高过六七成满了。)
那我能不能在Day1的时候直接把要测的reporter一起送进去呢?
或者说在Day2送。
因为上次这样做测出来的值相当的邪门，做为
consititutive active control的Renilla的值低到不可思议。
只有个位数或二十几。
恳请建议
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.135.214
1F：→ bill90128:如果把 shRNA 和 repoter 同时transfect呢? 12/20 01:32
2F：推 johanjohan:推楼上...另外 会不会是day3再一次transfect的效率低? 12/20 09:59
3F：→ harry:renilla的promoter若为TK，以下面paper为例，会受影响 12/20 10:30
5F：推 iceking:顺序颠倒,也就是先送reporter呢? 12/20 15:38
6F：→ FENOR:目前正在尝试一起送 12/20 22:52
7F：推 iceking:话说我们家的pRL-TK也都读不到值,害我都用其他方法做对照 12/21 11:29
8F：→ harry:如果不行的话，考虑一下CMV-RL 12/22 00:23
10F：推 bill90128:也可以考虑一下 transfection 时的细胞满度。不同试剂 12/23 22:48
11F：→ bill90128:需要不同的细胞满度才能达到最好效果。EX:lipo, CaPO4.. 12/23 22:49
12F：→ FENOR:最刚开始一起transfect进去看起来是reproducible 12/30 22:25