作者fcku413 (!!!!!!)
看板Biotech
標題PCR Tm值設定
時間Wed Dec 1 14:18:25 2010
在設定PCR program的時候會需要參考PRIMER的Tm值，
不過最近有時候再找一些commercial的primer時，
發現他們建議PCR program溫度設定的比Tm高很多，高出10幾度，
不知道這樣的設定是為了甚麼因素?
最近有一組primer 造他們建議的program設定跑不出來，
想說是不是回歸比較簡單的思考方向只在乎primer本身的Tm值，
不要用他們建議的program跑。
EX: primer Tm值 只有53度
program建議跑 94度->68度->72度 這樣的cycle
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◆ From: 140.113.173.216
※ 編輯: fcku413 來自: 140.113.173.216 (12/01 14:19)
※ 編輯: fcku413 來自: 140.113.173.216 (12/01 14:19)
1F：推 onlyone0419:通常是Tm正副5度內，看你片段長，再決定黏合時間長短 12/01 19:38
2F：→ onlyone0419:溫度越高專一性越高，溫度低會亂黏，可以TRY看看 12/01 19:39
3F：推 yaliu:68都可以annealing了，條件其實要自己try 12/01 19:48
4F：→ yaliu:如果primer是用程式跑出來的，我會按照程式的溫度 12/01 19:50
5F：→ yaliu:但如果是paper的 除了廠商建議的溫度外，我也會自己算 12/01 19:50
6F：推 joey0422: elongation 12/03 14:15
7F：→ joey0422:gradient pcr GO 12/03 14:15
8F：推 Cmetallifer:事實上Tm值跟設定的黏合本來就完全關係 XD 12/04 12:37
9F：→ Cmetallifer:所以建議你最好就是做個gradient PCR嚕~ 12/04 12:38
10F：推 yaliu:噗哧...剛剛才發覺我打錯了，是elongation啦XDDD 12/05 00:18