作者fcku413 (!!!!!!)
看板Biotech
标题PCR Tm值设定
时间Wed Dec 1 14:18:25 2010
在设定PCR program的时候会需要参考PRIMER的Tm值，
不过最近有时候再找一些commercial的primer时，
发现他们建议PCR program温度设定的比Tm高很多，高出10几度，
不知道这样的设定是为了甚麽因素?
最近有一组primer 造他们建议的program设定跑不出来，
想说是不是回归比较简单的思考方向只在乎primer本身的Tm值，
不要用他们建议的program跑。
EX: primer Tm值 只有53度
program建议跑 94度->68度->72度 这样的cycle
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◆ From: 140.113.173.216
※ 编辑: fcku413 来自: 140.113.173.216 (12/01 14:19)
※ 编辑: fcku413 来自: 140.113.173.216 (12/01 14:19)
1F：推 onlyone0419:通常是Tm正副5度内，看你片段长，再决定黏合时间长短 12/01 19:38
2F：→ onlyone0419:温度越高专一性越高，温度低会乱黏，可以TRY看看 12/01 19:39
3F：推 yaliu:68都可以annealing了，条件其实要自己try 12/01 19:48
4F：→ yaliu:如果primer是用程式跑出来的，我会按照程式的温度 12/01 19:50
5F：→ yaliu:但如果是paper的 除了厂商建议的温度外，我也会自己算 12/01 19:50
6F：推 joey0422: elongation 12/03 14:15
7F：→ joey0422:gradient pcr GO 12/03 14:15
8F：推 Cmetallifer:事实上Tm值跟设定的黏合本来就完全关系 XD 12/04 12:37
9F：→ Cmetallifer:所以建议你最好就是做个gradient PCR噜~ 12/04 12:38
10F：推 yaliu:噗哧...刚刚才发觉我打错了，是elongation啦XDDD 12/05 00:18