作者ayutu7673 (一層)
看板Biotech
標題[求救] 關於Ubiquitin的實驗
時間Mon Nov 29 23:19:55 2010
不好意思，想請問一下有人有做過ubiquitin的Western blot嗎?
我的實驗是將target protein Immunoprecipitate下來，然後再去blot ubiquitin
(endogenous IP,非overexpression system)
想請教一下要如何才能壓出像paper那樣的ubiquitin smear，
在實驗步驟上是不是有要特別注意的地方呢?
感恩
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◆ From: 140.112.130.90
1F：推 williamyang:加proteasome inhibitor,例如MG132.不過前提是你要看 11/30 02:15
2F：→ williamyang:的是K48 poly-ub 11/30 02:15
3F：→ ayutu7673:謝謝^^~不過我想要做的是K63的 好像比較難看到 11/30 10:49
4F：→ williamyang:要做K63的話,看你知不知道你的target protein的E3 11/30 10:59
5F：→ williamyang:用overexpression E3來增強你的K63 poly-ub 11/30 11:00
6F：→ williamyang:或是說知道哪些signaling能triger,外加刺激試試看 11/30 11:01
7F：→ ayutu7673:恩 感謝 我有加paper加的刺激,但壓片時還是壓不到 Orz 11/30 11:20
8F：推 slowmove:有加NEM嗎? 11/30 12:03
9F：→ ayutu7673:有^^ 11/30 14:36
10F：→ rimeni:anti-ub antibody是FK2嗎? 12/01 13:26
11F：→ ayutu7673:我們家是用santacruz的(paper上寫的) 難道這是關鍵!? 12/01 14:30