作者ayutu7673 (一层)
看板Biotech
标题[求救] 关於Ubiquitin的实验
时间Mon Nov 29 23:19:55 2010
不好意思，想请问一下有人有做过ubiquitin的Western blot吗?
我的实验是将target protein Immunoprecipitate下来，然後再去blot ubiquitin
(endogenous IP,非overexpression system)
想请教一下要如何才能压出像paper那样的ubiquitin smear，
在实验步骤上是不是有要特别注意的地方呢?
感恩
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◆ From: 140.112.130.90
1F：推 williamyang:加proteasome inhibitor,例如MG132.不过前提是你要看 11/30 02:15
2F：→ williamyang:的是K48 poly-ub 11/30 02:15
3F：→ ayutu7673:谢谢^^~不过我想要做的是K63的 好像比较难看到 11/30 10:49
4F：→ williamyang:要做K63的话,看你知不知道你的target protein的E3 11/30 10:59
5F：→ williamyang:用overexpression E3来增强你的K63 poly-ub 11/30 11:00
6F：→ williamyang:或是说知道哪些signaling能triger,外加刺激试试看 11/30 11:01
7F：→ ayutu7673:恩 感谢 我有加paper加的刺激,但压片时还是压不到 Orz 11/30 11:20
8F：推 slowmove:有加NEM吗? 11/30 12:03
9F：→ ayutu7673:有^^ 11/30 14:36
10F：→ rimeni:anti-ub antibody是FK2吗? 12/01 13:26
11F：→ ayutu7673:我们家是用santacruz的(paper上写的) 难道这是关键!? 12/01 14:30