作者pent (情人去死)
看板Biotech
標題[求救] 菌長不起來
時間Sat Nov 27 12:48:25 2010
我要抽大量的plasmid
同一個plate，
剛transform後，同一批Amp，只是有配新的LB，
但LB powder是kit，1L/25g，配法沒變，
上次轉大量有成功，
有凍(500ul 50%glycerol+500ul菌)一管起來
我的plasmid是買來的，之前的經驗是，
DH5a transform後隨便挑都長，也都有表現，
最近，從4度C cold room拿plate出來，十天前transform的plate
挑一些，種小量4ml，有時候長，有時候不長QQ，
有變得非常混濁的時候，抽plasmid，有，digest, pattern ok
從原本小量裡面吸個20ul，轉到另一管小量，搖個八小時，不長QQ
拿原本那管，重新搖八小時，有變濁，轉大量(200ml+400ul)，隔天又不長
想不出到底是啥原因，有人有這種奇怪的經驗嘛？
是因為從4度C一拿出來，要讓他wake up嘛？
還是我乾脆拿凍菌出來養？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：→ qumai:可以先重新劃在plate上~再挑single colony看看 11/27 17:15
2F：→ qumai:不然就重新transform吧 最保險 11/27 17:16
3F：→ sardine:你們實驗室對菌種保存都放在盤子上嗎.. 11/28 09:14
4F：→ sardine:我學姐她電完菌後會養6公升(OD600=0.6) 離心放-25度 11/28 09:22
5F：→ sardine:要養在挖一點出來放大 一直用到覺得表現量開始下降時 11/28 09:23
6F：→ sardine:再拿DNA重電一匹 11/28 09:23
7F：→ sardine:不過我不知道別人是怎麼做 她不喜歡放盤子上這麼久 11/28 09:32
8F：推 yawai:6公升不會太多了嗎@@ 11/28 11:35
9F：→ sardine:這...因為消耗的很快... 11/28 12:57
10F：→ yaprint:4度C放10天的菌不好吧 凍菌的保險多了 11/28 23:52
11F：→ ayuba:有這麼大的瓶子可以養菌喔...感覺就很嚇人 11/29 02:08
12F：→ sardine:6*1L 11/29 04:55
13F：→ icome:放盤子會死掉喔 建議菌液加glycerol凍在-80 11/29 13:03