作者pent (情人去死)
看板Biotech
标题[求救] 菌长不起来
时间Sat Nov 27 12:48:25 2010
我要抽大量的plasmid
同一个plate，
刚transform後，同一批Amp，只是有配新的LB，
但LB powder是kit，1L/25g，配法没变，
上次转大量有成功，
有冻(500ul 50%glycerol+500ul菌)一管起来
我的plasmid是买来的，之前的经验是，
DH5a transform後随便挑都长，也都有表现，
最近，从4度C cold room拿plate出来，十天前transform的plate
挑一些，种小量4ml，有时候长，有时候不长QQ，
有变得非常混浊的时候，抽plasmid，有，digest, pattern ok
从原本小量里面吸个20ul，转到另一管小量，摇个八小时，不长QQ
拿原本那管，重新摇八小时，有变浊，转大量(200ml+400ul)，隔天又不长
想不出到底是啥原因，有人有这种奇怪的经验嘛？
是因为从4度C一拿出来，要让他wake up嘛？
还是我乾脆拿冻菌出来养？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.60
1F：→ qumai:可以先重新划在plate上~再挑single colony看看 11/27 17:15
2F：→ qumai:不然就重新transform吧 最保险 11/27 17:16
3F：→ sardine:你们实验室对菌种保存都放在盘子上吗.. 11/28 09:14
4F：→ sardine:我学姐她电完菌後会养6公升(OD600=0.6) 离心放-25度 11/28 09:22
5F：→ sardine:要养在挖一点出来放大 一直用到觉得表现量开始下降时 11/28 09:23
6F：→ sardine:再拿DNA重电一匹 11/28 09:23
7F：→ sardine:不过我不知道别人是怎麽做 她不喜欢放盘子上这麽久 11/28 09:32
8F：推 yawai:6公升不会太多了吗@@ 11/28 11:35
9F：→ sardine:这...因为消耗的很快... 11/28 12:57
10F：→ yaprint:4度C放10天的菌不好吧 冻菌的保险多了 11/28 23:52
11F：→ ayuba:有这麽大的瓶子可以养菌喔...感觉就很吓人 11/29 02:08
12F：→ sardine:6*1L 11/29 04:55
13F：→ icome:放盘子会死掉喔 建议菌液加glycerol冻在-80 11/29 13:03