看到版上有人問抽DNA、RNA及跑電泳的問題 在此拋磚引玉一下 我不是啥強者 只是一般量產型的碩士生 板上很多強者應該可以狂電我 不過跑過的膠也有接近千片 可以小小分享一下電泳的經驗 因為已經畢業兩年多了 對實驗的印象有點糢糊 有錯誤的地方也請鞭小力點XD 我比較擅長的是抽菇類gDNA 抽大量(300ug-1mg)時用傳統方法 sample數多但只需小量時用kit抽 不過我的實驗材料用傳統方法抽起來品質較好 所以以下的圖都是用傳統方法抽的 我的sample含有很多醣類 所以沒純化乾淨的話跑起來會很醜 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630546&p=0 相對的 狀況較好時 就算一次loading很多也OK http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630547&p=1 在gDNA旁的marker通常只是為了預測濃度 大小是不準的 (要知道gDNA的確實大小要跑PFGE) 而plasmid的大小在沒切成linear前也不準 (圖中是約20-40kb的cosmid，一般KIT或傳統方法抽起來都差不多) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630549&p=2 跑plasmid或較大片段的PCR amplicon時要用1-10K或更大的marker (圖中為5.7k及3.7K的PCR產物) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630550&p=3 RNA變性電泳(這張圖是try濃度時跑的，不過要注意，由於pipette的誤差， loading到0.5ul以下時的濃度是不可信賴的，不管哪個牌子的pipette都一樣) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630551&p=4 RNA也可以用一般非變性的DNA gel來跑 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630552&p=5 跑大量sample時，多插幾排comb可以省時間也省錢(不過前提為片段大小不用太精準) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630553&p=6 如果不想用polyacrylamide gel，較高解析度的agarose在適當條件下也可以分離 僅差10bp以下的片段 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630554&p=7 沒有marker可用時 我都會自製marker...... http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630555&p=8 最後 送給大家這張圖 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630556&p=9 實驗不可能永遠不失敗 但是痛苦過後還是要繼續撐下去 (我也曾經同一個實驗卡住一年半 每天看結果只想罵幹) 做不出來多問問有經驗的學長姐或其他實驗室的人 會比自己亂try有效很多 不排斥的話可以上國外論壇爬文 http://www.protocol-online.org/forums/ http://molecularbiology.forums.biotechniques.com/ 這是我最常用的兩個 有關實驗技巧的資料非常豐富 幾乎都能找到解答 而且外國學者都很nice 所以我後來也註冊了帳號 有不懂的就去上面問問題XD 希望這篇文章能夠幫助到一些人~ --

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