看到版上有人问抽DNA、RNA及跑电泳的问题 在此抛砖引玉一下 我不是啥强者 只是一般量产型的硕士生 板上很多强者应该可以狂电我 不过跑过的胶也有接近千片 可以小小分享一下电泳的经验 因为已经毕业两年多了 对实验的印象有点馍糊 有错误的地方也请鞭小力点XD 我比较擅长的是抽菇类gDNA 抽大量(300ug-1mg)时用传统方法 sample数多但只需小量时用kit抽 不过我的实验材料用传统方法抽起来品质较好 所以以下的图都是用传统方法抽的 我的sample含有很多醣类 所以没纯化乾净的话跑起来会很丑 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630546&p=0 相对的 状况较好时 就算一次loading很多也OK http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630547&p=1 在gDNA旁的marker通常只是为了预测浓度 大小是不准的 (要知道gDNA的确实大小要跑PFGE) 而plasmid的大小在没切成linear前也不准 (图中是约20-40kb的cosmid，一般KIT或传统方法抽起来都差不多) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630549&p=2 跑plasmid或较大片段的PCR amplicon时要用1-10K或更大的marker (图中为5.7k及3.7K的PCR产物) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630550&p=3 RNA变性电泳(这张图是try浓度时跑的，不过要注意，由於pipette的误差， loading到0.5ul以下时的浓度是不可信赖的，不管哪个牌子的pipette都一样) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630551&p=4 RNA也可以用一般非变性的DNA gel来跑 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630552&p=5 跑大量sample时，多插几排comb可以省时间也省钱(不过前提为片段大小不用太精准) http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630553&p=6 如果不想用polyacrylamide gel，较高解析度的agarose在适当条件下也可以分离 仅差10bp以下的片段 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630554&p=7 没有marker可用时 我都会自制marker...... http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630555&p=8 最後 送给大家这张图 http://www.wretch.cc/album/show.php?i=MrCAKE&b=2&f=1285630556&p=9 实验不可能永远不失败 但是痛苦过後还是要继续撑下去 (我也曾经同一个实验卡住一年半 每天看结果只想骂干) 做不出来多问问有经验的学长姐或其他实验室的人 会比自己乱try有效很多 不排斥的话可以上国外论坛爬文 http://www.protocol-online.org/forums/ http://molecularbiology.forums.biotechniques.com/ 这是我最常用的两个 有关实验技巧的资料非常丰富 几乎都能找到解答 而且外国学者都很nice 所以我後来也注册了帐号 有不懂的就去上面问问题XD 希望这篇文章能够帮助到一些人~ --

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