作者luke12182006 (悠哉的風)
看板Biotech
標題[求救] RNA萃取
時間Sat Nov 20 12:47:45 2010
我是用Kit去抽RNA，我直接跳到問題部分...
最後一步萃取時沒換tube，結果我的RNA跟水和酒精就很融洽的混在一起了...
我想問的是有沒有辦法去除酒精而不讓RNA降解掉
或是去除水而讓RNA沉澱的方法，當然同樣要避免RNA降解或變性
請板上各位先進大大幫幫忙嚕~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.194.204.47
1F：→ blence:如果你的RNA跟水和酒精會融洽的混在一起,那前一個步驟過酒 11/20 14:44
2F：→ blence:精時,就已經一起被沖下來了 11/20 14:45
3F：推 CHOW:試試酒精沉澱後重新回溶? 11/20 19:27
4F：→ luke12182006:是混到舊tube中的酒精(之前wash buffer含的) 11/20 21:52
5F：→ luke12182006:怎麼酒精沉澱?大家就已經和樂融融的在一起了@@" 11/20 21:54
6F：推 leoblack:和樂融融在一起?!你不知道RNA不溶於酒精嘛!?怎麼和樂融融 11/20 23:13
7F：→ spirithorse:把那堆東西加isoprepanol重新沉澱嚕~ 11/20 23:14
8F：→ luke12182006:雖然RNA不溶於酒精，但溶於水啊，酒精是極性溶劑和水 11/21 00:07
9F：→ luke12182006:溶在一起是很合理的 11/21 00:07
10F：→ luke12182006:異丙醇溶水和酒精，雖不溶RNA，但同樣沒法拉出RNA 11/21 00:13
11F：→ luke12182006:就是因為有水QQ 11/21 00:13
12F：→ luke12182006:甲苯雖可以溶酒精不溶水，但是會使RNA降解... 11/21 00:16
13F：→ blence:上述都不是問題,你缺乏一般RNA extraction protoc操作經驗 11/21 01:26
14F：→ Ianthegood:請wiki ethanol precipitation 11/21 01:27
15F：推 yaliu:的確是用絕對酒精或者異丙醇可以沈澱核酸喔 11/21 01:39
16F：→ yaliu:異丙醇之前學到的要加等體積，絕對酒精是用2倍體積或者加點 11/21 01:41
17F：→ yaliu:高濃度鹽，可以參考molecular cloning~~詳細原理其實我也不 11/21 01:42
18F：→ yaliu:太了解.... 11/21 01:42
19F：→ yaliu:之前有同學抓RNA有用isopropanol 4度抓O.N.的，據說抓下來濃 11/21 01:43
20F：→ yaliu:度高，但是斷的也比較多...我想你還是重萃好了，RNA不好保存 11/21 01:44
21F：推 yaliu:回頭看了一下，有點不太懂，你的例子解決不就是再過一次 11/21 01:46
22F：→ yaliu:column就好了？？只是可能回收率不高，RNA濃度低而已？ 11/21 01:47
23F：推 spirithorse:請問那用phenolchloroform呢?? 11/21 11:48
24F：推 lulusa:Y大是正確的 請加入2X體積絕對酒精和1/10X的3M NaCl 11/23 22:05
25F：→ luke12182006:謝謝啦~ 11/25 21:34