作者Wacha (Wacha)
看板Biotech
標題[求救] 請問genomic DNA 在TE中要多久才完全溶解？
時間Sat Nov 6 04:20:25 2010
我用 QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit 抽 mice C2C12 cells
的 genomic DNA，根據protocol描述:
Resuspend the DNA in 0.1-2 ml of a suitable buffer (e.g. TE)
Dissolve the DNA overnight on a shaker or at 55C for 1-2 h.
可是我先搖 overnight 再放 55C 2小時，測DNA濃度大約只有40 ng/ul
,放-20C 冰箱隔天好奇再測一次濃度，就超過 200 ng/ul，個人認為
之前的步驟不足以完全溶解DNA。
這次抽完genomic DNA 打算在室溫下搖個三天三夜，請問不會有什麼
副作用呢？ 謝謝。
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◆ From: 128.32.214.112
※ 編輯: Wacha 來自: 128.32.214.112 (11/06 04:27)
1F：推 owl628:我抽酵母菌的gDNA一小時就溶了,濃度都好幾千ug/ml 11/06 06:22
2F：→ owl628:忘了說我溶在二次水而以 11/06 06:23
3F：→ Ianthegood:是不小心overdry了嗎XD 11/06 14:18
板上有文章說酒精殘留會影響後續實驗，所以我dry到看不到液體為止。
請問overdry會發生什麼事呢？
※ 編輯: Wacha 來自: 99.30.227.160 (11/06 14:27)
4F：推 sunnyforever:gDNA過乾極為難溶，最好在溼溼的情況下回溶 11/06 17:55
5F：→ sunnyforever:一般55度水浴配上慢速shaking，3~6小時就可以了 11/06 17:56
6F：→ sunnyforever:接著冰-20隔天再測濃度會溶得較為完全。 11/06 17:57
7F：推 owl628:乾到pellet看不到我溶了六小時都溶不完全,濕濕的一小時就很 11/06 20:25
8F：→ owl628:完全,所以真的不要放太乾 11/06 20:26
受教了，謝謝你們！
※ 編輯: Wacha 來自: 99.30.227.160 (11/07 07:01)
9F：→ icome:太乾DNA貌似會denature 11/07 23:57
10F：推 iceking:我也都是dry到全乾,看不到pellet. 可是都很好溶阿, 11/08 14:04
11F：→ iceking:濃度都很高耶~ 我都pippet幾下就去測濃度了~ 11/08 14:08
12F：→ scorpiuswu:懷疑樓上抽出來的DNA比較短...... 11/08 15:11
13F：→ iceking:抽出來比較短是...?? 不過我後面實驗都沒啥問題唷! 11/08 17:06
14F：→ scorpiuswu:我是推測你的DNA可能有片段化,所以好溶(分子量較小) 11/08 17:27
15F：→ scorpiuswu:隨機斷裂對實驗影響一般不大,除非很不幸都斷在重要處 11/08 17:30
16F：→ iceking:原來如此! 謝謝樓上! 我只是p 2百多bp的片段而已 xd 11/08 18:49
17F：推 michealking:不用那麼乾 酒精蒸發很快 11/09 16:46