作者Wacha (Wacha)
看板Biotech
标题[求救] 请问genomic DNA 在TE中要多久才完全溶解？
时间Sat Nov 6 04:20:25 2010
我用 QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Kit 抽 mice C2C12 cells
的 genomic DNA，根据protocol描述:
Resuspend the DNA in 0.1-2 ml of a suitable buffer (e.g. TE)
Dissolve the DNA overnight on a shaker or at 55C for 1-2 h.
可是我先摇 overnight 再放 55C 2小时，测DNA浓度大约只有40 ng/ul
,放-20C 冰箱隔天好奇再测一次浓度，就超过 200 ng/ul，个人认为
之前的步骤不足以完全溶解DNA。
这次抽完genomic DNA 打算在室温下摇个三天三夜，请问不会有什麽
副作用呢？ 谢谢。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 128.32.214.112
※ 编辑: Wacha 来自: 128.32.214.112 (11/06 04:27)
1F：推 owl628:我抽酵母菌的gDNA一小时就溶了,浓度都好几千ug/ml 11/06 06:22
2F：→ owl628:忘了说我溶在二次水而以 11/06 06:23
3F：→ Ianthegood:是不小心overdry了吗XD 11/06 14:18
板上有文章说酒精残留会影响後续实验，所以我dry到看不到液体为止。
请问overdry会发生什麽事呢？
※ 编辑: Wacha 来自: 99.30.227.160 (11/06 14:27)
4F：推 sunnyforever:gDNA过乾极为难溶，最好在湿湿的情况下回溶 11/06 17:55
5F：→ sunnyforever:一般55度水浴配上慢速shaking，3~6小时就可以了 11/06 17:56
6F：→ sunnyforever:接着冰-20隔天再测浓度会溶得较为完全。 11/06 17:57
7F：推 owl628:乾到pellet看不到我溶了六小时都溶不完全,湿湿的一小时就很 11/06 20:25
8F：→ owl628:完全,所以真的不要放太乾 11/06 20:26
受教了，谢谢你们！
※ 编辑: Wacha 来自: 99.30.227.160 (11/07 07:01)
9F：→ icome:太乾DNA貌似会denature 11/07 23:57
10F：推 iceking:我也都是dry到全乾,看不到pellet. 可是都很好溶阿, 11/08 14:04
11F：→ iceking:浓度都很高耶~ 我都pippet几下就去测浓度了~ 11/08 14:08
12F：→ scorpiuswu:怀疑楼上抽出来的DNA比较短...... 11/08 15:11
13F：→ iceking:抽出来比较短是...?? 不过我後面实验都没啥问题唷! 11/08 17:06
14F：→ scorpiuswu:我是推测你的DNA可能有片段化,所以好溶(分子量较小) 11/08 17:27
15F：→ scorpiuswu:随机断裂对实验影响一般不大,除非很不幸都断在重要处 11/08 17:30
16F：→ iceking:原来如此! 谢谢楼上! 我只是p 2百多bp的片段而已 xd 11/08 18:49
17F：推 michealking:不用那麽乾 酒精蒸发很快 11/09 16:46