※ 引述《keepseaching (絕心忘情)》之銘言： : 我在進行的實驗是將一段A基因約1kb : 接入pCambia2301這個vector約13kb : 所用的cutting site為BamHⅠ與XbaⅠ : 所用的條件如下 : Insert 10μl : Vector 4μl : bufferA 2μl : bufferB 2μl : Ligase 2μl 4℃反應overnight : 做了數次卻接不起來 : 基本上我的A基因與vector都check過了 : 所以我在猜想 : 是否是因為我選用的這兩個cutting site相鄰 : 導致用酵素切的時候沒辦法兩端都切 : 不知版上有經驗的版友 : 有沒有遇過類似的問題 可以參考這網站（不好意思　懶的縮網址） 　http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/ 　cleavage_olignucleotides.asp 　理論上xbaI酵素尾端只多１個nucleotide效率很差！根據這個表的結果效率～０ 　建議你先切XbaI再切EcoRI，EcoRI沒這個問題 　另外XbaI很容易受到甲基化的影響 　http://www.neb.uk.com/productcatalogue/productinfotransfer.aspx?id=faq-R0145 　若是他附近的site被甲基化就沒辦法切 （這個vector上面應該會標是他是否有被甲基化，若有就要用不會甲基化的菌來作）　 -- 單身不代表寂寞，寂寞是走在一個不愛妳的人身邊的時候。 --

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