※ 引述《keepseaching (绝心忘情)》之铭言： : 我在进行的实验是将一段A基因约1kb : 接入pCambia2301这个vector约13kb : 所用的cutting site为BamHⅠ与XbaⅠ : 所用的条件如下 : Insert 10μl : Vector 4μl : bufferA 2μl : bufferB 2μl : Ligase 2μl 4℃反应overnight : 做了数次却接不起来 : 基本上我的A基因与vector都check过了 : 所以我在猜想 : 是否是因为我选用的这两个cutting site相邻 : 导致用酵素切的时候没办法两端都切 : 不知版上有经验的版友 : 有没有遇过类似的问题 可以参考这网站（不好意思　懒的缩网址） 　http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/ 　cleavage_olignucleotides.asp 　理论上xbaI酵素尾端只多１个nucleotide效率很差！根据这个表的结果效率～０ 　建议你先切XbaI再切EcoRI，EcoRI没这个问题 　另外XbaI很容易受到甲基化的影响 　http://www.neb.uk.com/productcatalogue/productinfotransfer.aspx?id=faq-R0145 　若是他附近的site被甲基化就没办法切 （这个vector上面应该会标是他是否有被甲基化，若有就要用不会甲基化的菌来作）　 -- 单身不代表寂寞，寂寞是走在一个不爱你的人身边的时候。 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.253.121 ※ 编辑: aggaci 来自: 140.116.253.121 (11/03 14:01)