各位不好意思，最近我在進行蝕骨細胞(OC)分化實驗時 遇到了許多瓶頸，希望有曾經做過的人能給予一些建議 第一個是收取prostate cancer(PC3) 的 condition medium(CM) 處理RAW cell進行分化-- 目前參考許多paper以及老師以前的方法 是種 2x10^6 於10cm dish，隔天換1% medium培養48 hr 收取之上清液即為CM，而處理之方法為混合含有10%FBS新鮮medium 將CM稀釋為10%處理細胞，2~3天換一次，總共分化6天 而已經使用過RANKL當positive，確定RAW cell能分化成OC 但是CM處理之後完全無法分化成OC。 第二個實驗是取大鼠骨髓中之monocyte進行分化 -- 而方法也是參考以前實驗室的protocol 將大鼠犧牲後，取出腿骨，接著使用10% medium將骨髓中細胞沖出 靜置一天後，取出上清液中未貼附的細胞 接著數2x10^6種到24well中，添加50ng/ml RANKL及10ng/ml MCSF-7到10%FBS之培養基 2~3天更換一次並且添加RANKL及MCSF-7 但是我分化出來的都是fibroblast，沒有OC 目前不知道是哪邊出了問題，沒辦法repeat以前的分化實驗 希望有做過類似實驗的人 能分享一些經驗，感激不盡^^ 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- --

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