各位不好意思，最近我在进行蚀骨细胞(OC)分化实验时 遇到了许多瓶颈，希望有曾经做过的人能给予一些建议 第一个是收取prostate cancer(PC3) 的 condition medium(CM) 处理RAW cell进行分化-- 目前参考许多paper以及老师以前的方法 是种 2x10^6 於10cm dish，隔天换1% medium培养48 hr 收取之上清液即为CM，而处理之方法为混合含有10%FBS新鲜medium 将CM稀释为10%处理细胞，2~3天换一次，总共分化6天 而已经使用过RANKL当positive，确定RAW cell能分化成OC 但是CM处理之後完全无法分化成OC。 第二个实验是取大鼠骨髓中之monocyte进行分化 -- 而方法也是参考以前实验室的protocol 将大鼠牺牲後，取出腿骨，接着使用10% medium将骨髓中细胞冲出 静置一天後，取出上清液中未贴附的细胞 接着数2x10^6种到24well中，添加50ng/ml RANKL及10ng/ml MCSF-7到10%FBS之培养基 2~3天更换一次并且添加RANKL及MCSF-7 但是我分化出来的都是fibroblast，没有OC 目前不知道是哪边出了问题，没办法repeat以前的分化实验 希望有做过类似实验的人 能分享一些经验，感激不尽^^ 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 以方便板友帮您追踪问题 ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- --

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