作者sabayal (polar bear)
看板Biotech
標題[求救] renilla冷光測不到
時間Tue Oct 19 15:42:33 2010
實驗是以pGL3接要測定的Promoter作為test reporter
pRL-TK 作為internal control，雙冷光系統進行
plasmid比例pGL3:pRL-TK = 10:1(2ug:0.2ug)/well 在12well盤
transfection4~6小時，換有10%FBS的DMEM，培養24小時後
用promega公司的Dual-Glo luciferase assay syste分別偵測冷光值
問題來了
firefly luciferase的值有破萬
renilla luciferase的值跟背景值差不多(沒有破百)
也單獨轉pRL-TK vector進hela cell做測試，結果還是一樣
想請問有相關經驗的各位
有可能問題出在哪？
或是有含renilla基因的plasmid近期測試working正常，可以分一點給我嗎?
感激不盡。<(_ _)>
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.10
※ 編輯: sabayal 來自: 210.60.122.10 (10/19 15:46)
1F：推 kaifish:建議您定序或以限制酶檢查一下plasmid是否正確 10/19 16:20
2F：推 yuyao:請問你有Stop&Glo續加在LARII裡嗎? 這兩劑不能分開 10/19 20:38
3F：→ yuyao:promega這支產品的特性是要加在一起的 10/19 20:39